Strukturelle Aufklärung von Aptamer/Proteinkomplexen durch membrangebundene Peptid-Repertoires

我们已经在体外研究了一种用于检测细胞内蛋白质靶点和功能的方法，因此在生命周期中，Zellen的差异性很大。根据胞内适体表达（“Intrazellulären Aptamer-Expression”-Expression）的结果，我们可以将细胞表型分为两个部分：第一部分Rückschlüsse auf die Funktion der jeweiligen Protein埃尔兰根。Ziel dieses Antrags is es，eine genaue Vorstellung über die für die Bindung der Aptamere an ihr jeweiliges Proteintarget relevanten Regionen des Proteins zu埃尔兰根.本研究与AG Schneider-Mergener公司的13-14-mer肽阵列技术合作，用于合成膜上的珠宝原靶蛋白，并在韦尔登附近使用珠宝原同源物、放射性或荧光标记适体。Zunächst müssen die optimalen Interaktionsbedingungen des jeweligen Aptamer/Zielprotein-Systems optimiert韦尔登。Anhand des erhaltenen Interaktionsmusters sollen Rückschlüsse über die für die Bindung an das Aptamer relevanten Aminosaure-Seitenketten des Proteins möglich韦尔登. Zielproteine分为细胞质调节蛋白Cytohesin-1、神经肽Y和鼠朊蛋白。Später sollen auch natürliche RNA/Proteinkomplexe untersucht韦尔登.

Wir haben in früheren Arbeiten eine Reihe von Aptameren gegen verschiedene intrazelluläre Proteintargets selektiert und ihre Funktion in vitro, sowie in lebenden, hochdifferenzierten Zellen untersucht. Anhand der aus der intrazellulären Aptamer-Expression ("Intramer"-Expression) resultierenden zellulären Phänotypen konnten wir zum Teil Rückschlüsse auf die Funktion der jeweiligen Proteine erlangen. Ziel dieses Antrags ist es, eine genaue Vorstellung über die für die Bindung der Aptamere an ihr jeweiliges Proteintarget relevanten Regionen des Proteins zu erlangen. Dazu sollen in Zusammenarbeit mit der AG Schneider-Mergener 13-14-mer Peptid-Arrays des gesamten jeweiligen Targetproteins auf Membranen synthetisiert und mit dem jeweiligen cognaten, radioaktiv- oder fluoreszenzmarkierten Aptamer in Kontakt gebracht werden. Zunächst müssen die optimalen Interaktionsbedingungen des jeweiligen Aptamer/Zielprotein-Systems optimiert werden. Anhand des erhaltenen Interaktionsmusters sollen Rückschlüsse über die für die Bindung an das Aptamer relevanten Aminosäure-Seitenketten des Proteins möglich werden. Zielproteine sind zunächst das cytoplasmatische Regulatorproteine Cytohesin-1, das Neuropeptid Y und das murine Prionprotein. Später sollen auch natürliche RNA/Proteinkomplexe untersucht werden.