In vitro-Selektion und in vivo-Expression von Aptameren zur Analyse der molekularen Mechanismen der Zell/Zell-Kommunikation bei Drosophila und anderen zellulären Systemen

适体的体外选择和体内表达，分析果蝇和其他细胞系统中细胞/细胞通讯的分子机制

• 批准号: 5311164
• 负责人: Professor Dr. Michael Famulok
• 金额: --
• 依托单位: Abteilung für Chemische Biologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Units
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2004-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5311164?language=en
• 关键词: vitro; Selektion; und; vivo; Expression

Ziele dieses Antrags sind a) die in vitro-Selektion von RNA-Aptameren, die die intrazellulären Domänen von Gap junction-Proteinen der Innexin-Familie aus Drosophila binden und ihre Funktion inhibieren. Durch die in vivo-Expression inhibitorischer Aptamere (Intramere) in Zellkultur und in transgenen Drosophila Fliegen sollen Regionen der Kanalproteine charakterisiert werden, die die Oligomerisierung, die Lokalisierung bzw. ihre Kopplung kontrollieren. In Zusammenarbeit mit dem AK Hoch wollen wir einen Assay- zur Intramerabhängigen in vivo-Analyse der Innexin-2-Funktion im Proventrikulus-Organ entwickeln. Mit Hilfe selektierter anti-Innexin-2-Intramere wollen wir die Aktivität von Gap junctions im Proventrikulus blockieren und untersuchen, ob Wingless- und Hedgehog-Signale bzw. Integrin-vermittelte Zelladhäsionsprozesse betroffen sind. Dieses Projekt bildet den Hauptteil des Antrags. b) die Selektion und Charakterisierung von Aptameren gegen kurze Peptidsequenzen, die dem 3. extrazellulären Loop (EL3) des G-Protein-gekoppelten Purinrezeptors P2Y2 entsprechen (mit AK Müller). c) die Selektion von Aptameren, welche die dritte cyto-plasma-tische Domäne von humanem Smoothened binden, und ihre cytoplasmatische Expression in Medulloblastom-Zellinien (mit AK Schilling).

这些Antrags包括：a）在体外对RNA-Aptameren的选择性，细胞内对果蝇连接蛋白家族的缝隙连接蛋白的结构域的选择性及其功能的抑制。在转基因果蝇体内表达的嵌合体适体（胞内区）具有韦尔登特征，寡聚化，稳定化等特点。他们控制了局面。在与AK Hoch的合作中，我们将进行一项体内代谢物内分泌试验-- Mit Hilfe selektierter anti-Innexin-2-Intramere wirlen die Aktivität von Gap junctions im Proventrikulus blockieren und untersuchen，ob Wingless- und Hedgehog-Signale bzw.整合工作流程。这是安特拉格斯总部的教育项目。B）选择性和特征性的Aptameren gegen kurze肽序列，dem 3。Extrazellulären Loop（EL3）des G-Protein-gekoppelten Purinrezeptors P2Y2 entsprechen（mit AK Müller）. c）Aptameren的选择，人类平滑结合的细胞质结构域，及其在髓母细胞瘤-Zellinien中的细胞质表达（由AK Schilling）。