Entwicklung eines automatisierten, zeitaufgelösten High-throughput-Screening Assays zur Quantifizierung von Transkriptionsraten in vitro

in Rahmen des von der DFG geförderten projects wurde ein auf记者- ribozymen basierendes Verfahren entwickelt， welches die bestimung von Transkriptionsaktivitäten体外培养。[2] [j] [font =宋体]。詹尼，W. Gmelin， N. Raffler， M. Famulok, Angew。化学。Int。编辑，38(1999),13001303]。Auf Grundlage dieses报告系统公司在“高通量筛选（HTS）试验”中获得了成功，包括werwickelt werden， der die schnelle， automated Identifizierung von transcriptionsinbitoren和activatoren ermöglicht。deweteren soll as Verfahren angewandt werden， um mechanmen der pro and真核组织转录（z.B. den Einfluß von Enhancern） zu untersuchen。本实验最好的是einem核酶-辅酶dna -载体和einem寡核核苷酸-底物，即来自Ribozym gespalten风。荧光共振能量转移（FRET = Fluoreszenz Resonanz energy Transfer）底物（FRET = Fluoreszenz Resonanz energy Transfer），包括报告核酶（Reporter-Ribozym）、荧光信号（Fluoreszenz- signal）、转录核酶（transkribiertem Ribozym proportional ist）。Zeitabhängige荧光学与放射学之间的关系，荧光学与放射学之间的关系。TranskriptionsaktivitätenFerner wollen wir dem repatersystem Substanzen and natrichhe Interaktoren aus großen Substanzbibliotheken identifizien, welche die transcriptiongezielt beinfussen。

Im Rahmen des von der DFG geförderten Projekts wurde ein auf Reporter-Ribozymen basierendes Verfahren entwickelt, welches die Bestimmung von Transkriptionsaktivitäten in vitro erlaubt. Die prinzipielle Anwendbarkeit des Verfahrens wurde innerhalb dieses Jahres gezeigt und publiziert [A. Jenne, W. Gmelin, N. Raffler, M. Famulok, Angew. Chem. Int. Ed. 38 (1999), 13001303]. Auf Grundlage dieses Reporter-Systems soll nun ein "High-throughput-Screening (HTS) Assay" entwickelt werden, der die schnelle, automatisierte Identifizierung von Transkriptionsinhibitoren und -aktivatoren ermöglicht. Desweiteren soll das Verfahren angewandt werden, um Mechanismen der pro- und eukaryontischen Transkription (z.B. den Einfluß von Enhancern) zu untersuchen. Der Assay besteht aus einem Ribozym-codierenden DNA-Vektor und einem Oligonukleotid-Substrat, das vom Ribozym gespalten wird. Bei Spaltung des FRET-markierten Substrats (FRET = Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer) durch das Reporter-Ribozym, wird ein Fluoreszenz-Signal erzeugt, das der Menge an transkribiertem Ribozym proportional ist. Zeitabhängige Messung des spaltungsbedingten Fluoreszenzanstiegs erlaubt die schnelle, nicht-radioaktive Quantifizierung von Transkriptionsaktivitäten unter vielen verschiedenen Bedingungen. Ferner wollen wir mit dem Repaortersystem Substanzen und natürliche Interaktoren aus großen Substanzbibliotheken identifizieren, welche die Transkription gezielt beeinflussen.