Entwicklung eines automatisierten, zeitaufgelösten High-throughput-Screening Assays zur Quantifizierung von Transkriptionsraten in vitro

Im Rahman des von der DFG Egförderten Projekts wurein auf Reporter-Ribozymen basierendes Verfahren entwickelt，Wistches die Bstigmung von Transkritionsaktitiitäten in auf Reporter-Ribozymen basierendes Verfahren entwickelt.访问数/每百万人：Reach for[A.Jenne.化学。内部艾德。38(1999年)，13001303]。AUF Grundlage Dieses Reporter-Systems soll nun ein“High-Throughit-Screen(HTS)Assay”(高通量筛选(HTS)分析)中包含的信息，以及自动识别和传输抑制和激活的信息。Desweiteren soll das Verfahren Angewandt Wedden，um Machisman der Pro-and Enkontischen Transkription(z.B.den Eifuüvon Enhancern)zu unteruchenen.检测核酶-DNA密码子和寡核苷酸底物，以及核酶基因。BEI SPALTOUND DES FRET-标记底物(FRET=荧光共振能量转移)Das das Reporter-Ribozym，wird ein Fresreszenz-Signal Erzeugt，das der Menger an Transkribiertem Ribozym成比例。从现在到现在，我们不能把放射性物质的辐射转移到其他地方。费尔纳沃伦和他的心脏重建系统的物质和自然的相互作用，使物质的身份识别，以及他的翻译是最重要的。

Im Rahmen des von der DFG geförderten Projekts wurde ein auf Reporter-Ribozymen basierendes Verfahren entwickelt, welches die Bestimmung von Transkriptionsaktivitäten in vitro erlaubt. Die prinzipielle Anwendbarkeit des Verfahrens wurde innerhalb dieses Jahres gezeigt und publiziert [A. Jenne, W. Gmelin, N. Raffler, M. Famulok, Angew. Chem. Int. Ed. 38 (1999), 13001303]. Auf Grundlage dieses Reporter-Systems soll nun ein "High-throughput-Screening (HTS) Assay" entwickelt werden, der die schnelle, automatisierte Identifizierung von Transkriptionsinhibitoren und -aktivatoren ermöglicht. Desweiteren soll das Verfahren angewandt werden, um Mechanismen der pro- und eukaryontischen Transkription (z.B. den Einfluß von Enhancern) zu untersuchen. Der Assay besteht aus einem Ribozym-codierenden DNA-Vektor und einem Oligonukleotid-Substrat, das vom Ribozym gespalten wird. Bei Spaltung des FRET-markierten Substrats (FRET = Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer) durch das Reporter-Ribozym, wird ein Fluoreszenz-Signal erzeugt, das der Menge an transkribiertem Ribozym proportional ist. Zeitabhängige Messung des spaltungsbedingten Fluoreszenzanstiegs erlaubt die schnelle, nicht-radioaktive Quantifizierung von Transkriptionsaktivitäten unter vielen verschiedenen Bedingungen. Ferner wollen wir mit dem Repaortersystem Substanzen und natürliche Interaktoren aus großen Substanzbibliotheken identifizieren, welche die Transkription gezielt beeinflussen.