Entwicklung eines automatisierten, zeitaufgelösten High-throughput-Screening Assays zur Quantifizierung von Transkriptionsraten in vitro

开发自动化、时间分辨高通量筛选测定法以量化体外转录率

• 批准号: 5147120
• 负责人: Professor Dr. Michael Famulok
• 金额: --
• 依托单位: Abteilung für Chemische Biologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1997-12-31 至 2004-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5147120?language=en
• 关键词: Entwicklung; eines; automatisierten; zeitaufgel; sten

Im Rahmen des von der DFG geförderten Projekts wurde ein auf Reporter-Ribozymen basierendes Verfahren entwickelt, welches die Bestimmung von Transkriptionsaktivitäten in vitro erlaubt. Die prinzipielle Anwendbarkeit des Verfahrens wurde innerhalb dieses Jahres gezeigt und publiziert [A. Jenne, W. Gmelin, N. Raffler, M. Famulok, Angew. Chem. Int. Ed. 38 (1999), 13001303]. Auf Grundlage dieses Reporter-Systems soll nun ein "High-throughput-Screening (HTS) Assay" entwickelt werden, der die schnelle, automatisierte Identifizierung von Transkriptionsinhibitoren und -aktivatoren ermöglicht. Desweiteren soll das Verfahren angewandt werden, um Mechanismen der pro- und eukaryontischen Transkription (z.B. den Einfluß von Enhancern) zu untersuchen. Der Assay besteht aus einem Ribozym-codierenden DNA-Vektor und einem Oligonukleotid-Substrat, das vom Ribozym gespalten wird. Bei Spaltung des FRET-markierten Substrats (FRET = Fluoreszenz Resonanz Energie Transfer) durch das Reporter-Ribozym, wird ein Fluoreszenz-Signal erzeugt, das der Menge an transkribiertem Ribozym proportional ist. Zeitabhängige Messung des spaltungsbedingten Fluoreszenzanstiegs erlaubt die schnelle, nicht-radioaktive Quantifizierung von Transkriptionsaktivitäten unter vielen verschiedenen Bedingungen. Ferner wollen wir mit dem Repaortersystem Substanzen und natürliche Interaktoren aus großen Substanzbibliotheken identifizieren, welche die Transkription gezielt beeinflussen.

in Rahmen des von der DFG geförderten projects wurde ein auf记者- ribozymen basierendes Verfahren entwickelt， welches die bestimung von Transkriptionsaktivitäten体外培养。[2] [j] [font =宋体]。詹尼，W. Gmelin， N. Raffler， M. Famulok, Angew。化学。Int。编辑，38(1999),13001303]。Auf Grundlage dieses报告系统公司在“高通量筛选（HTS）试验”中获得了成功，包括werwickelt werden， der die schnelle， automated Identifizierung von transcriptionsinbitoren和activatoren ermöglicht。deweteren soll as Verfahren angewandt werden， um mechanmen der pro and真核组织转录（z.B. den Einfluß von Enhancern） zu untersuchen。本实验最好的是einem核酶-辅酶dna -载体和einem寡核核苷酸-底物，即来自Ribozym gespalten风。荧光共振能量转移（FRET = Fluoreszenz Resonanz energy Transfer）底物（FRET = Fluoreszenz Resonanz energy Transfer），包括报告核酶（Reporter-Ribozym）、荧光信号（Fluoreszenz- signal）、转录核酶（transkribiertem Ribozym proportional ist）。Zeitabhängige荧光学与放射学之间的关系，荧光学与放射学之间的关系。TranskriptionsaktivitätenFerner wollen wir dem repatersystem Substanzen and natrichhe Interaktoren aus großen Substanzbibliotheken identifizien, welche die transcriptiongezielt beinfussen。