Analyse der Komplexbildung und Membranassoziation der heterotetramen Adaptorproteine AP -1 und AP-2 mit Cargoproteinen HIV-1 Nef und CD4

Die heterotetrameren adaptorprotein复合物AP-1和AP-2缔合物连接磷脂膜和erkenenenendozytotische信号动机membranständiger protein， Die sie， Cargo aunemen和weiterleiten können。基于酪氨酸的信号动机与ap -复合物的相互作用。[8] [j] [D/E] [D/E] [j]。溶酶体vermittelt， i die Bindungsstelle auf den ap - complex dagegen unbekant。Das einzige cytosolische Protein, desen intrazellulärer Transport <e:1> ber ein dileuzin - motive erfolt, ist Das HIV-1 Nef Protein。[qh] [gehört] HIV-Proteinen与HIV-Proteinen的关系研究[j]。祖den Funktionen von Nef gehört die Manipulation intrazellulärer protein transportge， insbesonere fr die Rezeptorproteine CD4和MHC I， durch die interakmit AP-1和AP-2。Die zentralen Ziele dieses forschungsvohabens and Die Formierung des endozyzed - activen CD4/Nef/ ap - 1 / 2复合物，Die Analyse der lipidbinding seigenschaften sowie Die结晶和strukturestimering eines AP-Nef复合物。在Vorarbeiten中，AP-1和AP-2的分子量为210 kDa，而AP-1和AP-2的分子量为240 kDa，而AP-1和AP-2的分子量为240 kDa。[2][2][0][0][0][0][0][0][0][0]。

Die heterotetrameren Adaptorproteinkomplexe AP-1 und AP-2 assoziieren mit Phospholipidmembranen und erkennen endozytotische Signalmotive membranständiger Proteine, die sie als Cargo aufnehmen und weiterleiten können. Die Bindungsstelle für das Tyrosin-basierte Signalmotiv YxxL liegt auf der |i-Untereinheit der AP-Komplexe. Für das sogenannte Dileuzin-Motiv (D/E)xxxLL, das den Transport von Proteinen zu Endosomen bzw. Lysosomen vermittelt, ist die Bindungsstelle auf den AP-Komplexen dagegen unbekannt. Das einzige cytosolische Protein, dessen intrazellulärer Transport über ein Dileuzin-Motiv erfolgt, ist das HIV-1 Nef Protein. Nef gehört zu den akzessorischen HIV-Proteinen und ist entscheidend für die produktive Virusreplikation und das Voranschreiten zu AIDS. Zu den Funktionen von Nef gehört die Manipulation intrazellulärer Proteintransportwege, insbesondere für die Rezeptorproteine CD4 und MHC I, durch die Interaktion mit AP-1 und AP-2. Die zentralen Ziele dieses Forschungsvorhabens sind die Formierung des Endozytose-aktiven CD4/Nef/AP-l/-2 Komplexes, die Analyse der Lipidbindungseigenschaften sowie die Kristallisation und Strukturbestimmung eines AP-Nef Komplexes. In Vorarbeiten haben wir die etwa 210 kDa großen heterotetrameren AP-1 und AP-2 fnwfc-Komplexe sowie einen 240 kDa großen Fusionskomplex mit Nef produziert und die Bindung an Phosphoinositol-markierten Lipidmembranen gezeigt. Die hier geplanten Arbeiten werden wesentlich zum Verständnis der molekularen Mechanismen der Clathrin-vermittelten Endozytose beitragen.