Die Rolle intestinaler microRNAs und ihrer Zielgene in der postnatalen Darmentwicklung von Ferkeln insbesondere während der Absetzphase und nach Pathogen- sowie Probiotika-Pathogen-Exposition

肠道 microRNA 及其靶基因在仔猪产后肠道发育中的作用，特别是在断奶阶段以及病原体和益生菌-病原体暴露后

• 批准号: 134123672
• 负责人: Privatdozent Dr. Soroush Sharbati
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Veterinär-Biochemie (WE03)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2008-12-31 至 2012-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/134123672?language=en
• 关键词: Die; Rolle; intestinaler; microRNAs; und

Es ist wenig bekannt über die Genregulation bei der postnatalen Darmentwicklung des Schweins. In diesem Projekt soll die Rolle regulatorischer microRNAs (miRNAs) und der durch sie beeinflussten Gene bei der postnatalen Darmentwicklung in Ferkeln untersucht werden, wobei die Absetzphase besonders gewichtet wird. Dieser Zeitraum ist von zentraler physiologischer Relevanz, da während dieser Periode die Ferkel massiv neuen Antigenen ausgesetzt werden. Hierbei muss das mukosale Immunsystem zwischen harmlosen und Pathogen-assoziierten Antigenen unterscheiden. Diese Vorgänge resultieren häufig in extreme Empfindlichkeit der Ferkel. Um diese entwicklungsabhängigen zellulären Prozesse besser verstehen zu können sollen in der Phase 7-56 Tage nach der Geburt von Ferkeln Expressionsprofile von miRNAs und ihren Zielgenen im Ileum und Colon ascendens erstellt werden. Die gemeinsame Analyse beider Expressionshierarchien dient dazu potenzielle Kandidaten von regulatorischen miRNAs und der durch sie regulierten Stoffwechsel- und Signaltransduktionswege zu identifizieren. Um Pathogenassoziierte Reaktionen der Tiere während der Absetzphase zu studieren, werden die erhaltenen Daten mit betreffenden Expressionsprofilen von Ferkeln verglichen, die nach dem Absetzen mit Salmonella typhimurium infiziert wurden. Zusätzlich soll der protektive Einfluss eines kommerziell eingesetzten probiotischen Bakteriums (Enterococcus faecium) während einer artifiziellen Salmonelleninfektion in der Absetzphase ermittelt werden. Weiterführend bietet dieses Projekt die Möglichkeit generelle Regulationen zellulärer Vorgänge im Darmgewebe (z.B. mukosale Immunantwort) zu studieren und neue Therapie-Ansatzpunkte im Bereich der Ferkelhaltung zu erschließen. Wichtige Grundlage für die hier vorgeschlagenen Arbeiten sind die uns schon vorliegenden intestinalen Gewebeproben aus einem umfangreichen Probiotika- bzw. Challenge-Fütterungsversuch (Forschergruppe FOR 438 „Integrative Analyse der Wirkmechanismen von Probiotika beim Schwein“). Die hier zu erwartenden Forschungsergebnisse am gewählten Ferkelmodell lassen auch neue Ansätze in der Behandlung von chronisch entzündlichen Darmerkrankungen (CED) des Menschen erhoffen.Folgende Untersuchungen sollen durchgeführt werden:1.) Generelle erste Identifizierung der miRNA-Sequenzen aus porcinen Intestinalproben anhand neuartiger „Deep Sequencing“ Methoden und Erfassung ihrer evolutiven Konservierung2.) Erfassung der miRNA- und mRNA-Expressionsprofile anhand von Microarray- Experimenten sowie korrelative Signalweg-Analyse zur Ermittlung potenzieller Zielgene während der postnatalen Darmentwicklung insbesondere nach Pathogen- bzw. Pathogen-Probiotika-Interaktion während der Absetzphase.3.) Validierung und Quantifizierung ausgewählter Kandidatengene (miRNAs und Protein-kodierende Gene) mittels real-time RT-PCR, sowie deren Lokalisation mittels in situ Hybridisierung (miRNAs) und Immunhistochemie (mRNA).4.) Ausgewählte in vivo Expressions-Daten werden durch Funktionsanalysen (Mimic/Reporter-Assays) in einem in vitro Schweinedarm-Zellmodell (Zelllinie IPEC-J2) verifiziert.

这是因为遗传调节是猪出生后的遗传调节。在这项研究中，发现了调节基因microRNAs（miRNAs）的作用及其对韦尔登出生后发育的影响。这一时期是一个重要的生理学相关时期，在这个时期，新的抗原可以被韦尔登吸收。因此，我们必须对免疫系统的功能和病原体相关抗原进行研究。这是一种极端的饥饿感。在第7-56期研究中，我们可以通过对miRNAs的表达谱的分析以及对结肠和结肠中的Zielgenen表达谱的分析来确定最佳的治疗方案，这两项研究均在韦尔登中进行。表达谱分析可以有效地识别调节miRNAs的基因，并通过调节蛋白质和信号转导途径进行识别。通过研究结核病的病原学反应，韦尔登用更好的表达谱分析了结核病与鼠伤寒沙门氏菌感染的关系。Zusätzlich soll der protektive Einfluss eines kommerziell eingesetzten probiotischen Bakterium（Enterococcus faecium）während einer artifiziellen Salmonelleninfektion in der Absetzphase ermittelt韦尔登。Weiterführend bietet dieses Projekt die Möglichkeit generelle Regulationen zellulärer Vorgänge im Darmgewebe（z.B. mukosale Immunantwort）进行研究并在Bereich der Ferkelhaltung zu erschließen进行新治疗分析。Wichtige Grundlage für die pervorgeschlagenen Arbeiten sind die uns schon vorliegenden pervinalen Gewebebebebeben aus einem umfangreichen Probiotika- bzw. Fütterungsversuch（Forschergruppe FOR 438“Integrative Analyse der Wirkmechanismen von Probiotika beim Schwein”）。Die extensizu erwartenden Forschungsergebnisse am gewählten Ferkelmodell lassen auch neue Ansätze in der Behandlung von chronisch entzündlichen Darmerkrankungen（CED）des Menschen erhoffen.Folgende Untersuchungen sollen durchgeführt韦尔登：1.）一般先鉴定来自猪肠道的miRNA-Sequenzen，然后再进行新的“深度测序”方法和进化研究2。）通过微阵列-实验相关的信号通路-分析，研究了与病原体相关的出生后组织病理学变化。Pathogen-Probiotika-Interaktion während der Absetzphase.3.）验证和定量检测基因（miRNAs和蛋白质-kodierende基因）使用实时RT-PCR，sowie deren Lokalisation使用原位杂交（miRNAs）和免疫组织化学（mRNA）。在体外Schweinedarm-Zellmodell（Zelllinie IPEC-J2）验证中，通过功能分析（模拟/报告者测定）获得体内表达数据韦尔登。