Funktionelle und strukturelle Charakterisierung des UbiX Flavoproteins von Escherichia coli

大肠杆菌 UbiX 黄素蛋白的功能和结构表征

• 批准号: 28525154
• 负责人: Privatdozent Dr. Thomas Kupke
• 金额: --
• 依托单位: Zentrum für Molekulare Biologie (ZMBH)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/28525154?language=en
• 关键词: Funktionelle; und; strukturelle; Charakterisierung; des

Im Rahmen des Forschungsstipendiums soll das Flavoprotein UbiX aus Escherichia coli funktioneil und strukturell charakterisiert werden. UbiX wurde als rosanes Fusionsprotein gereinigt und Denaturierung dieses Fusionsproteins durch Säurebehandlung ermöglichte die Ablösung, anschliessende Reinigung und massenspektrometrische Analyse von an UbiX gebundenen Substanzen. So konnte gezeigt werden, dass eine der gebundenen Substanzen der Kofaktor Flavinmononukleotid ist. Bei den anderen Substanzen handelte es sich teils um rosane, teils um grün-blaue Addukte von Flavinmononukleotid mit niedermolekularen Verbindungen, die in den meisten Fällen fünf C-Atome hatten; eine dieser Verbindungen besitzt z. B. die Summenformel C5H8. Dies legt eine Verbindung von UbiX mit dem Isopentenyldiphosphat-Stoffwechsel (und damit dem Isoprenoid-Stoffwechsel) nahe. Allerdings ist UbiX (wie auch das putative Isoenzym UbiD) als 3-Octaprenyl-4-hydroxybenzoat-Decarboxylase annotiert worden und soll damit an der Ubiquinon-Biosynthese beteiligt sein. Diese Reaktion wurde aber bisher nicht in-vitro mit rekombinantem Protein gezeigt. Das Ziel des Forschungsvorhabens ist es, herauszufinden, welche Reaktion UbiX katalysiert, welcher Mechanismus dieser Reaktion zugrunde liegt, welche Aminosäurereste von UbiX das aktive Zentrum des Enzyms bilden und wie es zur Bildung der kovalenten Flavin-Addukte kommt.

大肠杆菌黄素蛋白UbiX的功能和结构特性是研究的基础。UbiX是通过对UbiX进行物质分析、荧光增强和质谱分析而产生和变性的融合蛋白。所以韦尔登知道，有一种物质是由黄素单核苷酸钾引起的。在其他物质的作用下，玫瑰色的黄素单核苷酸的蓝色添加剂与其他分子的作用一起，在C原子哈滕的大部分Fällen中死亡;一个分子的作用是Z。B。C5 H8的总结。UbiX与异戊烯基二磷酸-Stoffwechsel（和类异戊二烯-Stoffwechsel）的结合是合法的。UbiX（也被认为是UbiD同工酶）是3-辛异戊二烯基-4-羟基苯甲酸脱羧酶的标记物，它沃登和破坏了泛素生物合成。这种反应在体外不需要重组蛋白。研究结果表明，UbiX反应的催化作用、反应机理以及UbiX的氨基代谢产物是酶活性中心的活性产物，也是黄素-Addukte复合物的活性产物。