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Molekularbiologische Charakterisierung des Flavoenzyms EpiD und biochemische Analyse der Peptidyl-Aminoenthiolat-Reaktionsprodukte

黄素酶 EpiD 的分子生物学表征和肽基氨基硫醇反应产物的生化分析

基本信息

批准号：
5137854
负责人：
Privatdozent Dr. Thomas Kupke
金额：
--
依托单位：
Zentrum für Molekulare Biologie (ZMBH)
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
1998
资助国家：
德国
起止时间：
1997-12-31 至 2001-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5137854?language=en
关键词：
Molekularbiologische Charakterisierung des Flavoenzyms EpiD

项目摘要

Der Schwerpunkt des beantragten Projektes ist die weitere molekularbiologische und biochemische Charakterisierung des FMNhaltigen Flavoenzyms EpiD. EpiD ist an der Biosynthese des Lantibiotikums Epidermin beteiligt. Unter Lantibiotika versteht man Peptide, die die Thioetheraminosäure Lanthionin enthalten, und antimikrobielle Aktivität besitzen. Lantibiotika werden als Vorläuferpeptide ribosomal synthetisiert und anschließend posttranslationell modifiziert. EpiD katalysiert die oxidative Decarboxylierung des C-terminalen Cysteinrestes des EpiderminVorläuferpeptids EpiA. EpiD gehört zu einer neuen Familie von Flavoproteinen, für die die Bezeichnung HEPG-Proteine eingeführt wird. Im bisherigen Verlauf des Forschungsprojektes wurden durch Ortsspezifische Mutagenese Aminosäurereste von EpiD identifiziert, die entweder wichtig für die Coenzymbindung (C8, S37, H67, P81, S83, N85, K89, G93, D96, P114) oder für die enzymatische Aktivität (H67, N115 und M120) sind. Ferner wurde das homologe Enzym der Mersacidinbiosynthese, MrsD, exprimiert, als Fusionsprotein gereinigt und als FAD-haltiges Flavoenzym identifiziert. In der Arbeitsgruppe von Dr. S. Steinbacher/Prof. Dr. R. Huber gelang die Kristallstrukturanalyse von EpiD. Außerdem gibt es erste Ergebnisse zur Kristallstruktur von MrsD. EpiD und MrsD liegen als Homododekamere vor (Tetramere von Trimeren). Die für die Strukturanalyse benötigten Überexpressionsklone wurden in Tübingen konstruiert.

Der Schwerpunkt des beantragten Projektes ist die weitere分子生物学和生物化学特性研究的fmntigen黄酶EpiD。EpiD的筛选及其生物合成。在lantiltika versteht man Peptide下，die die Thioetheraminosäure Lanthionin enthalten, and anti - bielle Aktivität besitzen。lantitika werden也Vorläuferpeptide核糖体合成和anschließend翻译后修饰。EpiA催化氧化脱羧酸酯c端半胱氨酸酯EpiderminVorläuferpeptids EpiA。EpiD gehört zu einer neuen Familie von Flavoproteinen, fr die die Bezeichnung HEPG-Proteine eingef<s:1> hrt wind。in bisherigen Verlauf des Forschungsprojektes wurden durch Ortsspezifische Mutagenese Aminosäurereste von EpiD identifiziert， die entweder whichtig fgr die辅酶结合（C8, S37, H67, P81, S83, N85, K89, G93, D96, P114） oder fgr die酶结合Aktivität (H67， N115和M120) sind。Ferner wurde de mersacidinbiosynthesis同源酶，MrsD，实验，融合蛋白基因和FAD-haltiges黄酶鉴定。In der Arbeitsgruppe von S. Steinbacher博士/Prof。Dr. R. Huber gelang die crystal strukturanalyse von EpiD。他说：“我认为这是一个很好的例子。”EpiD和MrsD liegen als Homododekamere vor （Tetramere von Trimeren）。模具结构分析benötigten Überexpressionsklone在<s:1>宾根工程中的应用。