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SATIC法による細胞内マイクロRNAイメージング技術の開発

利用 SATIC 方法开发细胞内 microRNA 成像技术

基本信息

批准号：
21K05317
负责人：
桑原正靖
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本法ではこれまでにｍＲＮＡの特異的検出系の開発を行ってきたがｍＲＮＡとは異なり、ｍｉＲＮＡは２０ｍｅｒ程度の短鎖であるため、増幅反応における開始複合体の形態を最近接塩基対パラメータ（ｎｅａｒｅｓｔ　ｎｅｉｇｈｂｏｒ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）を用いた核酸の安定性予測に基づき種々検討した。ｍｉＲＮＡ標的の検出系では、標的のヌクレオチド鎖と検出試薬のひとつである捕捉ヌクレオチド鎖との解離・結合によるターンオーバーがないため、検出感度は概して長鎖のｍＲＮＡ標的よりも劣ることが当初より分かっていた。しかし、本研究において、シグナル増幅をもたらすポリメラーゼ反応による増幅配列の最適化を行ったり、φ２９ＤＮＡポリメラーゼやＢｓｔ　ＤＮＡポリメラーゼ、ＫＯＤ　ＤＮＡポリメラーゼなど用いる酵素やその組み合わせ等を変更したりすることにより反応効率を高めることができ、当該問題について解決の目途が付けられた。さらに、配列が異なる複数の標的を同時に検出するための蛍光プローブであるチオフラビンT誘導体やマラカイトグリーン等の誘導体を新たに得ることができた。マラカイトグリーンは発光波長がチオフラビンＴよりも長波長にあり（λｅｍ　＝　６３０ｎｍ）、従来、核酸プローブとして使用されてきたが、疎水性が高く非特異的な吸着等の問題があった。本研究では、エチレングリコール鎖等の導入により親水性を高めた誘導体を設計・合成することができた。

In this law, the export system of the mRNA program is responsible for the short-term distribution of the mRNA, the 20mer of the miRNA, and the number of customers. At the beginning of the reaction, the complex is recently connected to the base station (nearest neighbor parameters), which is stable to all kinds of basic materials with nucleic acid. The system of the miRNA system, the system of the mRNA, the system of the device, the system of the device, the In this study, the results of this study show that there is a significant increase in the rate of response, such as the most accurate response, φ 29DNA response, Bst DNA response, KOD DNA response, and so on. in this study, we compared the results in this study. When the problem is solved, you will pay for it on the way. At the same time, you need to change the number of copies of the system, and at the same time, you need to change the number of copies. At the same time, you need to change the number of copies of the system. The optical wavelengths are sensitive to the optical wavelengths (λ em = 630nm), and the nucleic acids are sensitive to the use of photoluminescence, water-borne and non-specific absorption, and so on. The purpose of this study is to design and synthesize the design of the water-based high-temperature equipment in this study, such as the design and synthesis of the water-based high-temperature equipment.