一塩基多型(SNPs)検出のための修飾DNAアプタマーの創製

创建用于单核苷酸多态性 (SNP) 检测的修饰 DNA 适体

• 批准号: 14011203
• 负责人: 桑原 正靖
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011203/
• 关键词: 核酸; ゲノム; バイオテクノロジー; 生体生命情報学; 有機化学

1)「種々の修飾ヌクレオシド三リン酸の合成と修飾DNAのPCRによる酵素的合成」本年度の研究において、アミノ酸をリンカー末端に導入した種々の修飾チミジン三リン酸や5位に1-アミノ-3,6-ジオキサヘプチル基修飾デオキシウリジン三リン酸(修飾dUTP)を新規に合成した。さらに、核酸塩基が異なる修飾デオキシシチジン三リン酸(修飾dCTP)も合成した。これらの修飾ヌクレオシド三リン酸が耐熱性DNAポリメラーゼに基質として認識され、PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)によって対応する修飾DNAが生成することを明らかにした。^<(1)>興味深いことに、天然型のdCTPとTTPの代わりに修飾dCTPと修飾dUTPを用いてPCRを行った結果、両方の修飾ヌクレオチドが導入された修飾DNAの生成が確認された。これは二種類の異なる機能基をもつ修飾DNAが酵素的に合成できることを示唆している。^<(2)>一方、修飾ヌクレオシド三リン酸を基質として認識する耐熱性DNAポリメラーゼの探索も行った。その結果、KOD Dashの他にvent(exo-)やPfuがチミジンの5位への修飾に寛容であることが新たにわかった。^<(3)>以上(1)(2)(3)に述べたように、修飾DNAの酵素的合成に適用可能な修飾ヌクレオシド三リン酸のレパートリーを大幅に拡張することができた。2)「試験管内選択系の確立と機能評価」55塩基のランダム配列の両端にそれぞれ20塩基のプライマー配列を含む95塩基長の天然型DNAを基に1.9×10^<13>通りの配列を含む一本鎖のアミノ修飾DNAライブラリーを調製した。修飾ヌクレオシド三リン酸にはアミノヘキシルカルバミルメチル修飾デオキシウリジン三リン酸を用いた。調製した修飾DNAライブラリー中から、シングルミスマッチ構造を含む二重鎖DNAに特異的に結合する修飾DNAを選択する操作を現在進行中である。

1) "Synthetic and modified DNA-modified DNA-PCR kits" "Synthesis of るEnzyme" This year's research of において, アミノ acid をリンカー terminal に introduction したKind of modified チミジン三リン acid や5 position に1-アミノ-3,6-ジオキサヘプThe チル-modified デオキシウリジンtrimonic acid (modified dUTP) is newly synthesized.さらに、Nucleic acid hydroxyl isoisoなる modified デオキシシチジンtriリン acid (modified dCTP) is synthesized. P CR (chain reaction) is a chain reaction that modifies DNA and generates it. ^<(1)>The interest is deep, the natural type dCTP, the TTP, the modified dCTP, and the modified dUTP. Confirm the result of PCR using PCR and the modification of modified DNA by importing the modified DNA. Synthetic enzymes that modify DNA with two different functional groups and enzymes are used to synthesize enzymes. ^<(2)>On the one hand, modified ヌクレオシド三リン acid を matrix として recognizes するheat-resistant DNA ポリメラーゼのExploration も行った.そのRESULTS, KOD Dashのhisにvent(exo-)やPfuがチミジンの5-bit へのmodificationに寛尊であることが新たにわかった. ^<(3)>The above (1)(2)(3) are suitable for the synthesis of DNA-modifying enzymes. Use the possible な modified ヌクレオシド三リン acid のレパートリーを large-scale に拡张することができた. 2) "Functional Evaluation of the Establishment of the Selection System in the Test Tube" 55婩 Based on the のランダムmatching の両ENDにそれぞれ20 塩 Based on the のプライマーmatching をcontaining 95 The base length of the natural DNA base is 1.9 × 10^<13> 通りの配arrayをcontainingむ一本 lock のアミノmodified DNA ライブラリーをmodulation した. Modification of ヌクレオシド三リン acid にはアミノヘキシルカルバMiracle modified デオキシウリジン三リン acid をいた. Modulated DNA ライブラリー中から, シングルミスマッチstructure をcontaining むdouble The operation of locking DNA, binding and modifying DNA specifically, is currently in progress.