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Study on the mechanism of histone H2A.Z remodeling and development of a novel reprogramming technology

组蛋白H2A.Z重塑机制研究及新型重编程技术开发

基本信息

批准号：
21K05978
负责人：
三谷匡
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kindai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、体細胞核移植（SCNT）胚の発生能を改善するHDAC阻害剤がSCNT後のドナー細胞核からのヒストンH2A.Zの除去作用をもつことに着目し、その分子メカニズムを解明することを目的とする。［課題Ⅰ］受精卵におけるヒストンH2A.Zの除去過程で相互作用する因子の探索と機能解析活性化卵子(6hpa)に電気穿孔法でGFP-H2A.Z及びH2A.XのC末端23個のアミノ酸を付加したGFP-H2A.Z_XC23 mRNAを導入し局在について解析した。その結果、GFP-H2A.Zは24hpaから急速に消失する一方、GFP-H2A.Z_XC23は48hpaまで核内に維持された。さらに、GFP-H2A.Z_XC23の発現により発生遅延や発生停止が観察された。次に、同様の方法で、ヒストンH2A.Zの除去機構への新規転写の関与について検討を行った。その結果、αアマニチン6~24hpa添加区では徐々に減少は認めたものの96hpaにおいても核局在は維持された。これらの結果より、ヒストンH2A.Zの除去には卵子の活性化に伴う新規転写が関与している可能性が示された。［課題Ⅱ］受精卵におけるHDAC阻害剤と相互作用する因子の探索と機能解析SCNTで有効なHDACiであるSAHA固定化した磁気ビーズを用いて、線維芽細胞、MⅡ期卵子、活性化卵子(6hpa)でChemical pull-downと質量解析を行った。その結果、線維芽細胞からは864因子、MII期卵子からは139因子、6hpaからは101因子が検出された。MII期卵子と活性化卵子で共通して検出される卵子特異的なSAHAのターゲットを16因子に絞り込んだ。そのうちIsoform 2 of Probable E3 ubiquitin-protein ligase (DTX2)のみMII期卵子と活性化卵子で高頻度に検出されていた。DTX2はZn fingerのひとつであるRING finger domainを有しており、in vitro translationとchemical pull-downによりSAHAと直接相互作用することを確認した。以上から、DTX2の阻害作用がSCNT後の発生能改善に繋がっている可能性が示された。

In this study, somatic nuclear transfer (SCNT) embryos can improve the ability of HDAC to block SCNT and remove the effect of H2A.Z. [topic I] fertilized eggs were tested for the removal of process-dependent interaction factors by H2A.Z analysis. Activated eggs (6hpa) were analyzed by computer piercing method, GFP-H2A.Z and GFP-H2A.Z_XC23 mRNA were added to the C-terminal of H2A.X. The results of the test, the rapid disappearance of the GFP-H2A.Z 24hpa, and the maintenance of the GFP-H2A.Z_XC23 48hpa in the core. In the first place, the GFP-H2A.Z_XC23 will see that there is a delay in the health of the students. Second, use the same method, use the same method, and delete the new rules and regulations of the organization to delete the new rules and regulations. The results show that there is a significant increase in the number of errors in the 6~24hpa addition area. There is a significant increase in the number of 96hpa in the nuclear bureau. The result of the experiment shows that the possibility of removing the activation of eggs with new rules and changes in the H2A.Z is significant. Exploration of HDAC inhibition factors in fertilized eggs can be used to analyze the HDACi of SCNT, the immobilization of SAHA, the quantitative analysis of Chemical pull-down of zygotes, MII eggs, active eggs and activated eggs. The results showed that 864 factors of cell cycle, 139factors of oocyte cycle in MII stage, 101factors of 6hpa cycle were detected. The MII stage egg "active egg" has the same function as "SAHA egg", "16 factors" and "egg specific". Isoform 2 of Probable E3 ubiquitin-protein ligase (DTX2), MII stage egg, active egg, high degree of egg, egg, DTX2, Zn finger, chemical pull-down, RING finger domain, in vitro translation, chemical pull-down, SAHA, direct interaction, confirmation. The above anti-toxic effects of DTX2 can improve health after SCNT. The possibility of improvement is significant.

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

マウス卵子におけるヒストン脱アセチル化酵素阻害剤の標的分子の探索．

寻找小鼠卵母细胞中组蛋白脱乙酰酶抑制剂的靶分子。

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Di ZHAO;Yuta SAWADA;Yuichi HIRAOKA;Tomoji MASHIMO;Kohichi TANAKA;Saeko ISHIDA;和田菜那美，妻木孝憲，杉浦麻妃瑠，山本真穂子，大下莉奈，種子田妃良，黒坂哲，中家雅隆，三谷匡．
通讯作者：
和田菜那美，妻木孝憲，杉浦麻妃瑠，山本真穂子，大下莉奈，種子田妃良，黒坂哲，中家雅隆，三谷匡．

マウス活性化卵子におけるヒストンH2A. Zの除去に対する新規転写の関与．

从头转录参与小鼠激活卵母细胞中组蛋白 H2A.Z 的去除。