がん生育に有利に働く低頻度遺伝子変異の効率的同定戦略

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がんゲノム変異の90%以上は機能未知の低頻度変異が占めている．しかしながら，これらの変異とがんとの関連を明らかにする戦略は確立されておらず，新たな治療標的の探索は進んでいない．そこで本研究では，がんゲノム低頻度変異がタンパク質間相互作用に及ぼす影響を迅速に評価することで，がん生育に有利に働く変異を効率よく同定する戦略の確立を目指す。今年度は、KEAP1-Rab8aの相互作用が細胞増殖を抑制するという前年度までの結果を受け、がん変異によるKEAP1-Rab8a相互作用の破綻が細胞増殖に及ぼす影響を調べた。まず、KEAPの機能がほぼ欠損しているA549細胞に対して野生型あるいは変異型KEAP1を安定発現する細胞株を樹立した。これらの細胞の増殖能を調べたところ、野生型KEAP1発現株の増殖が、変異型KEAP1発現株と比較して抑制される傾向はあったものの、有意な差は見られなかった。引き続き、実験条件を見直すとともに、マウスへの移植実験を行う予定である。また、変異集積領域に着目する戦略によりその他のがん変異タンパク質の異常な相互作用が見いだせるかを検証した。大腸がんの15%に変異が認められるFBXW7はE3ユビキチンリガーゼ複合体の構成因子であるが、in silico解析の結果，その基質認識ドメイン中に変異集積が見出された。この領域に結合する因子を独自手法である細胞内光クロスリンク法により捕捉し、質量分析により同定した。