再生胸腺微小環境によるT細胞の誘導　　―γδT細胞の産生と悪性腫瘍への応用―

再生胸腺微环境诱导T细胞-γδT细胞的产生及其在恶性肿瘤中的应用-

基本信息

批准号：
21K06977
负责人：
保坂直樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kansai Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06977/
关键词：
胸腺 γδT細胞再生

项目摘要

本研究課題ではin vitroにてマウス人工性多能性幹細胞（induced pluripotent stem cells, iPSC）から胸腺上皮細胞(thymic epithelial cells, TEC)を誘導し、胸腺微小環境を構築の下、非iPS細胞由来の造血幹細胞(hematopoietic stem cells: HSC)との共培養によりγδT細胞の誘導を試みるものである。これらのγδT細胞は腫瘍化への危険が低く、治療への応用が期待できる。本課題では特に抗腫瘍効果について調べる。方法として、まずiPSCに適宜Activin A, Fibroblast growth factor(FGF)7, FGF8, FGF10, bone morphogenetic protein (BMP) 4を加え、内中胚葉及び胚体内胚葉を経由してTECを誘導させる。次に骨髄細胞(bone marrow cells:BMC)における単核球からlineage marker陽性細胞をmagnetic beads法にて除去し、HSCとして精製する(HSC-eBMC)。これらのTECとHSC-eBMCをサイトカインの存在下に相互作用させると、γδT細胞が誘導された。副作用を調べる為に自家骨髄移植したマウスに投与したが、明らかな自己免疫疾患や腫瘍の発生は見られず長期に生存した。また担白血病腫瘍マウスに投与すると、腫瘍の抑制とともに延命効果が得られた(J Cell Mol Med. 25: 10604, 2021)。次にin vitroにて、PD-L1発現腫瘍細胞への抗腫瘍効果を調べた。誘導γδT細胞との共培養にて、PD-1抗体投与郡と非投与群とを比較した所、前者ではγδT細胞の割合が増え、かつ腫瘍細胞の割合が減る傾向にあった。またこれらの実験で使用するiPSCを肝細胞由来のものに変えても、同様のγδT細胞の誘導が見られた。

该研究主题是在体外诱导小鼠人造多能干细胞（IPSC）诱导胸腺上皮细胞（TEC），并通过与非侵入型造血的造血干细胞（HSC）共同培养，以代替胸膜微环境来诱导γδT细胞。这些γδT细胞的肿瘤风险很低，预计将应用于治疗应用。该主题将特别研究抗肿瘤作用。作为一种方法，首先是AIVICIN A，成纤维细胞生长因子（FGF）7，FGF8，FGF10，骨形态发生蛋白（BMP）4被适当地添加到IPSC中，并且TEC是通过内胚层和确定的内胚层诱导的。接下来，使用磁珠方法从骨髓细胞（BMC）中的单核细胞中除去谱系标记阳性细胞，并纯化为HSC（HSC-EBMC）。在细胞因子诱导的γδT细胞存在下，将这些TEC与HSC-EBMC相互作用。为了研究副作用，将小鼠施用到自体骨髓移植物上，但是没有发现明显的自身免疫性疾病或肿瘤发育，并且患者长期存活。此外，对含白血病的肿瘤小鼠的给药表现出延长的寿命和抑制作用（J细胞摩尔医学25：10604，2021）。接下来，研究了对PD-L1表达肿瘤细胞的抗肿瘤作用。当与诱导的γδT细胞共培养时，PD-1抗体管理组和非辅助组之间的比较表明，前者的γδT细胞比例增加，肿瘤细胞的比例降低。此外，当这些实验中使用的IPSC变为源自肝细胞的IPSC时，观察到γδT细胞的相似诱导。