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ボツリヌス症を治療するヒト型抗体製剤の開発に向けた基盤研究

开发治疗肉毒中毒的人源抗体制剂的基础研究

基本信息

批准号：
21K07021
负责人：
松村拓大
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ヒトにボツリヌス中毒を起こすボツリヌス毒素に対する安全で高い中和力価を持ち、なおかつ生産効率の良い抗毒素抗体（ヒト型抗体）製剤セットの作出を目指す。これまで、B型ボツリヌス毒素（BoNT/B）を中和するヒト型抗体M2およびM4の中和機構を解析し、M4はBoNT/Bの神経細胞への結合を阻害し、M2はBoNT/Bの神経細胞への結合、基質（VAMP2）切断以外の過程を阻害していることを明らかにしている。M2は活性ドメイン（軽鎖）の小胞内から細胞質への移行（トランスロケーション）を阻害している可能性が考えられたため、その過程を解析する実験系の構築を試み、リポソームを用いたアッセイ方法を検討中である。A型ボツリヌス毒素(BoNT/A)に対するヒト型抗体については4種(NT-523、NT-320、BT-015、BT-175)の抗体産生細胞が樹立されている。培養上清より抗体（IgG）を精製し、BoNT/Aとの結合をELISAで解析した結果、NT-320、BT-015、BT-175はBoNT/A特異的に結合し、NT-523は非特異的な結合を示すことが明らかとなった。また、Competition ELISAによりエピトープの重複を解析した結果、顕著な結合阻害は示さず、それぞれの抗体は異なるエピトープを認識していることが明らかとなった。この結果より、NT-320、BT-015、BT-175は組み合わせて使用することが可能であることが示唆された。一方で、マウスバイオアッセイにて中和活性を解析した結果、NT-320、BT-015、BT-175は単独で中和活性を示し、さらに抗体を組み合わせることにより活性が上昇することが明らかとなった。

This study provides guidance for the preparation of antitoxin antibodies (antitoxin antibodies) with high neutralizing power, high production efficiency and safety. The neutralizing mechanisms of M2 and M4, which neutralize BoNT/B, block the binding of M4 to neurons, block the binding of M2 to neurons and block processes other than matrix (VAMP2) cleavage. The possibility of M2 inhibiting cytoplasmic migration from active cells is examined, and the process is analyzed. The system is constructed, and the solution is discussed using the method. Antibody-producing cells of four types (NT-523, NT-320, BT-015, BT-175) of antibody-producing cells against BoNT/A were established. Culture supernatant antibody (IgG) purification, BoNT/A binding, ELISA analysis results, NT-320, BT-015, BT-175 BoNT/A specific binding, NT-523 non-specific binding, show that. The results of the repeated analysis of the Competition ELISA were as follows: The result is that NT-320, BT-015 and BT-175 can be used together. NT-320, BT-015 and BT-175 showed their neutralizing activity independently, and their antibody activity increased.

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Rare toxin A-negative and toxin B-positive strain of Clostridioides difficile from Japan lacking a complete tcdA gene.

来自日本的罕见毒素 A 阴性和毒素 B 阳性艰难梭菌菌株，缺乏完整的 tcdA 基因。

DOI：
10.1016/j.jiac.2022.01.015
发表时间：
2022
期刊：
J Infect Chemother.
影响因子：
0
作者：
Takemori-Sakai Y;Satou K;Senda Y;Nakamura Y;Otani H;Maekawa A;Oe H;Oshima M;Yoneda-Nakagawa S;Miyagawa T;Sato K;Ogura H;Mori M;Wada T;Sakai Y;Yutani M;Matsumura T;Fujinaga Y;Gabata T;Wada T;Iwata Y.
通讯作者：
Iwata Y.

Endogenous production and neurotoxicity of novel botulinum neurotoxin (BoNT/X) in a clinical isolate

临床分离物中新型肉毒神经毒素（BoNT/X）的内源性产生和神经毒性