抗がん剤耐性を打破するmRNAスプライシング制御ペプチドの開発

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(１）過剰発現したSPF45によって異常スプライシングが誘導される遺伝子群を同定し、抗癌剤耐性獲得のメカニズムを解明するSPF45を過剰発現する細胞を構築し、RNA-Seqにより異常スプライシングが誘導される遺伝子群を同定する。現在、SPF45を過剰発現するHeLa細胞を構築しており、RNA-Seqに向けて準備中である。また、抗癌剤耐性を示す細胞株を単離し、SPF45の発現を解析していった結果、Lovo細胞株を5FUで処理して得られた耐性株においてSPF45の過剰発現を確認した。今後、これらの細胞のRNA-Seqを行うことによって、SPF45が異常スプライシングを誘導する抗癌剤耐性責任遺伝子の同定を進める。(２）SPF45依存的スプライシング制御機構の解明SPF45の相互作用因子としてSAP30BPという因子を同定した。SAP30BPは、スプライシング反応を触媒するスプライソソームに含まれていることがわかっているが、その機能はわかっていない。SAP30BP遺伝子の発現抑制を行なったHeLa細胞とSPF45遺伝子の発現抑制を行なったHeLa細胞のRNA-seqを行ない、スプライシング阻害されるイントロンを比較すると、そのほとんどが共通であった。このことから、SAP30BPはSPF45と協調して、短いイントロンのスプライシングを制御していると考えられる。さらに、SAP30BPとSPF45のリコンビナントタンパク質を精製し、相互作用を調べて結果、SPF45のUHMドメインとSAP30BPのULMドメインで直接結合する事を明らかにした。この成果は、現在、論文投稿中である。