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不死化したヒト乳歯歯髄幹細胞の培養上清の基礎的解析と褥瘡マウスモデルの治療効果

永生化人乳牙牙髓干细胞培养上清的基础分析及对压疮小鼠模型的治疗作用

基本信息

批准号：
21K09779
负责人：
村上史浩
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K09779/
关键词：
歯髄幹細胞不死化細胞培養上清褥瘡モデルマウス

项目摘要

2022年度は、褥瘡モデルマウスを用いて不死化した乳歯由来歯髄幹細胞の培養上清（SHED-CM）の潰瘍形成の抑制効果とその作用機序について検討を行った。① 褥瘡モデルマウスの治療効果：褥瘡モデルは、マウス背中の毛を剃った後、2つの円形磁石で皮膚を12時間挟み、その後、磁石を外してさらに12時間放置し、一過性虚血再灌流障害を誘導し潰瘍を形成させるモデルを用いた。虚血再灌流処置の5日後をピークに潰瘍が形成され、その程度を、経時的に皮膚潰瘍形成の様子を写真をとり、ImageJを用いて面積を算出し、比較検討した。無血清の培地で培養し回収したSHED-CM、および、そのコントロールとして無血清培地を、100 μlずつ左右の磁石を置いた周りに連日皮内注射すると、SHED-CM投与により潰瘍形成が有意に抑制された。次に、褥瘡形成のピークを過ぎた6日から投与してもその治療効果が見られた。② 褥瘡モデルマウスでの作用機序：SHED-CMの網羅的サイトカイン発現解析より発現の高かった肝細胞増殖因子（HGF）と血管内皮細胞増殖因子（VEGF）について、それぞれの特異的抗体を用いて免疫除去すると、コントロール抗体処理に比べ、有意に潰瘍形成抑制効果が減弱化した。この時、HGFの免疫除去により参加ストレスマーカー8-OHdG（8-hydroxy-2’-deoxyguanosine）に対する抗体を用いた皮膚局所の免疫染色により酸化されたDNAの割合が軽減し、さらに、血管内皮細胞のマーカーCD31に対する抗体による免疫染色により新生血管の割合が低下していた。以上の結果より、SHED-CMは、虚血再灌流障害により誘導される潰瘍形成を、HGFとVEGFを介して抑制する可能性が示唆された。

In 2022, we conducted a study on the mechanism of inhibition of ulcer formation in cultured supernatant (SHED-CM) of breast derived dental stem cells. The treatment effect of decubitus ulcer: decubitus ulcer, hair on the back of decubitus ulcer after shaving, 2 round magnet, skin for 12 time, magnet for 12 time, transient blood reperfusion injury induced by ulcer formation, decubitus ulcer after shaving. 5 days after reperfusion treatment, the formation of ulcer, the degree of ulcer, the formation of ulcer, ImageJ, and the area of ulcer were calculated and compared. Serum-free culture medium, 100 μ l magnet, intradermal injection medium, SHED-CM injection medium, 100 μl magnet, 100 μl magnet, intradermal injection medium, SHED-CM injection medium, 100 μl magnet, 100 μ l magnet, 10 The treatment of decubitus ulcer was found on the 6th day of treatment. 2. The mechanism of decubitus ulcer formation: SHED-CM's network of high level hepatocyte growth factor (HGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) were detected, and specific antibodies were used to eliminate decubitus ulcer formation. At this time, HGF immunoremoval was associated with the presence of 8-OHdG (8-hydroxy-2'-deoxyguanosine) antibodies in the skin. Immunostaining was performed to acidify DNA cleavage, and immunostaining was performed to detect CD31 in vascular endothelial cells. These results suggest that SHED-CM may be an inhibitor of HGF and VEGF in the formation of ulcers induced by reperfusion.

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Protective effects of conditioned media of immortalized stem cells from human exfoliated deciduous teeth on pressure ulcer formation.

DOI：
10.3389/fimmu.2022.1010700
发表时间：
2022
期刊：
FRONTIERS IN IMMUNOLOGY
影响因子：
7.3
作者：
Katahira, Yasuhiro;Murakami, Fumihiro;Inoue, Shinya;Miyakawa, Satomi;Sakamoto, Eri;Furusaka, Yuma;Watanabe, Aruma;Sekine, Ami;Kuroda, Masahiko;Hasegawa, Hideaki;Mizoguchi, Izuru;Yoshimoto, Takayuki
通讯作者：
Yoshimoto, Takayuki

不死化したヒト歯髄由来間葉系幹細胞(MSC)培養上清の褥瘡モデルマウス皮膚潰瘍に対する治療効果と作用機序の検討

永生化人牙髓间充质干细胞（MSCs）培养上清液对压疮模型小鼠皮肤溃疡的治疗效果及作用机制研究