DMBT1 involvement in induction of oral mucositis by Candida

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今年度は、Candida albicansとDMBT1の機能領域であるSRCRP2との反応に関わる菌体成分の同定に取り組み、以下の成果を得た。１．菌体表層成分をzymolyase処理によって抽出し、硫安沈殿を経て、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー法で分画した。次に、C. albicans菌体のSRCRP2への結合に及ぼす各画分の抑制効果を調べた。その後、抑制効果を示す画分を集めてSDS-PAGEで調べたところ、25 kDaの単一バンドとして認められた。２．精製成分を質量分析で同定したところ、C. albicansの60SリボソームタンパクL10aであることが明らかになった。３． 精製成分に対するマウス抗血清を作成し、菌体の免疫染色を行ったところ、その成分が菌体表層に局在することが確認された。４．C. albicans菌体をガラスビーズで破砕し、遠心操作によって細胞壁成分と細胞質成分に分けた。各成分をSDS-PAGE後、精製成分に対するマウス抗血清を用いてウエスタンブロットを行ったところ、精製成分は細胞壁成分中に含まれることが明らかになった。５．C. albicans菌体をマイクロプレートに固定し、精製成分に対するマウス抗血清を用いてcell ELISAを行った。その結果、抗血清は免疫前血清に比べてより強く菌体を認識した。以上の結果から、分離試製された25 kDaタンパク質はC. albicans菌体表層に局在し、SRCRP2との結合反応に関与することが明らかとなった。