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DMBT1 involvement in induction of oral mucositis by Candida

DMBT1 参与念珠菌诱导口腔粘膜炎

基本信息

批准号：
21K10214
负责人：
於保孝彦
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K10214/
关键词：
カンジダ菌口腔粘膜炎 DMBT1

项目摘要

今年度は、Candida albicansとDMBT1の機能領域であるSRCRP2との反応に関わる菌体成分の同定に取り組み、以下の成果を得た。１．菌体表層成分をzymolyase処理によって抽出し、硫安沈殿を経て、陰イオン交換カラムクロマトグラフィー法で分画した。次に、C. albicans菌体のSRCRP2への結合に及ぼす各画分の抑制効果を調べた。その後、抑制効果を示す画分を集めてSDS-PAGEで調べたところ、25 kDaの単一バンドとして認められた。２．精製成分を質量分析で同定したところ、C. albicansの60SリボソームタンパクL10aであることが明らかになった。３．精製成分に対するマウス抗血清を作成し、菌体の免疫染色を行ったところ、その成分が菌体表層に局在することが確認された。４．C. albicans菌体をガラスビーズで破砕し、遠心操作によって細胞壁成分と細胞質成分に分けた。各成分をSDS-PAGE後、精製成分に対するマウス抗血清を用いてウエスタンブロットを行ったところ、精製成分は細胞壁成分中に含まれることが明らかになった。５．C. albicans菌体をマイクロプレートに固定し、精製成分に対するマウス抗血清を用いてcell ELISAを行った。その結果、抗血清は免疫前血清に比べてより強く菌体を認識した。以上の結果から、分離試製された25 kDaタンパク質はC. albicans菌体表層に局在し、SRCRP2との結合反応に関与することが明らかとなった。

This year, Candida albicans and DMBT1 were selected from the functional areas of SRCRP2 and related to the identification of bacterial components. The following results were obtained. 1. The surface components of the bacteria were extracted by zymolyase treatment, and then separated by sulfur precipitation and anion exchange. C. The binding of SRCRP2 in albicans and the inhibition effect of each component are regulated. The results of SDS-PAGE showed that the molecular weight of the protein was 25 kDa. 2. Quality analysis of refined components is the same as that of C. Albicans and 60S are the best choice for L10a 3. Preparation of antiserum for purified components, immunostaining of bacteria, and identification of components in the surface layer of bacteria 4.C. Albicans cell wall components and cytoplasmic components are separated by telecentric manipulation. After SDS-PAGE, the purified components are used in the antiserum, and the purified components are used in the cell wall. 5.C. Albicans are immobilized and purified by cell ELISA. The result is that the antiserum is stronger than the pre-immune serum. The above results show that C. Albicans bacteria surface layer, SRCRP2 and binding anti-inflammatory and anti-inflammatory