LAPosomeの形成と成熟化の分子機構を明らかにする

阐明 LAPosome 形成和成熟的分子机制

基本信息

  • 批准号:
    20K06641
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.75万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2020
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2020-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

LC3-associated phagocytosis (LAP)において、LC3が局在するLAPosomeは、内部の成熟反応が亢進するがその機構は不明な点が多い。これまでに樹立したLAP関連因子MORN2を過剰発現するLAPosome形成効率の高いマクロファージ(MΦ-MORN2)株を用いて、本研究ではSNARE蛋白質SNAP-23に着目し、MORN2やLC3との関連を解析し「LAPosomeの形成と成熟化の分子機構」を明らかにすることを目的とした。令和4年度は、昨年度に引き続き計画②「MORN2とSNAP-23の機能的相互作用の解明」および計画③「LC3とSNAP-23の機能的相互作用の解明」を行った。細胞の状態が悪くなったため、新たにGFP-MORN2とMyc-ALFA-SNAP23を共発現するMΦ株を樹立した。SNAP23は野生型、リン酸化型、非リン酸化型それぞれを発現させた。その結果、SNAP23のリン酸化状態はLAPosome形成効率に影響しなかった。つまり、LC3のphagosome局在化後にSNAP23のリン酸が起こる可能性が考えられた。また、これらの細胞を用いた免疫沈降では、MORN2とLC3についてSNAP23との相互作用は検出できなかった。現在、LC3の膜局在を誘導しSNAP23との相互作用も報告されているAtg16L1について、phagosome膜上でのSNAP23とLC3との共局在のタイミングと相互作用について検証を進めている。さらに、MORN2と相互作用する因子の網羅的解析を行った。mVenus-ALFAとmVenus-ALFA-MORN2をそれぞれ安定発現するMΦ株を樹立し、anti-ALFA nanobodyを用いて免疫沈降した。それぞれの細胞は、zymosanの有無でphagocytosisを誘導した後に回収し、その抽出液を免疫沈降に用いた。免疫沈降物について、研究協力者の福島県立医大・和田教授に質量分析を依頼した。その結果、MORN2と相互作用する因子としてPI4Kα (phosphatidylinositol 4-kinase α)を見出した。現在、クローニングしたPI4KαとMORN2をHEK293T細胞に一過的に発現させ、相互作用を解析している。
LC3-associated phagocytosis (LAP) is the most common form of LAPoset, and the most common form of LAPoset is the most common form of LAPoset. In this study, we analyzed the relationship between SNARE protein SNAP-23, MORN2 and LC3, and the molecular mechanism of LAPoome formation and maturation. In 2004, we launched two projects: ① "Understanding the Functional Interaction of MORN2 and SNAP-23" and ③ "Understanding the Functional Interaction of LC3 and SNAP-23." The cell status is different from that of GFP-MORN2 and Myc-ALFA-SNAP23. SNAP23 is found in wild type, acidified type and non-acidified type. As a result, SNAP23's acidification status affects LAPoset formation efficiency. The possibility of SNAP23 in phagosome after transformation is examined. The interaction between MORN2 and LC3 and SNAP23 is not detected. Now, the LC3 film is induced by SNAP23 and the interaction is reported. Atg16L1 film is reported. Phagosome film is induced by SNAP23 and LC3 film is reported by SNAP23 and the interaction is reported. The analysis of MORN2 interaction factors and their nets is carried out. mVenus-ALFA and mVenus-ALFA-MORN2 are used to stabilize MΦ plants and anti-ALFA nanobody. In addition, the presence or absence of phagocytosis in the cells and zymosan was also detected by immunoprecipitation. Immunoprecipitate analysis by Professor Wada of Fukushima Prefectural Medical University The results showed that MORN2 interaction factor was PI4Kα (phosphatidylinositol 4-kinase α). Now, PI4K α and MORN2 are involved in the development and interaction of HEK293 T cells.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Characterization of MORN2 stability and regulatory function in LC3-associated phagocytosis in macrophages
MORN2 稳定性和巨噬细胞 LC3 相关吞噬作用调节功能的表征
  • DOI:
    10.1242/bio.051029
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Maya Morita;Mayu Kajiye;Chiye Sakurai;Shuichi Kubo;Miki Takahashi;Daiki Kinoshita;Naohiro Hori;Kiyotaka Hatsuzawa
  • 通讯作者:
    Kiyotaka Hatsuzawa
MORN2はSNAP-23のファゴソーム膜局在量を増加させ、非標準的オートファジーを亢進する
MORN2 增加 SNAP-23 的吞噬体膜定位并增强非典型自噬
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    森田真矢;梶江真由;櫻井千恵;初沢清隆
  • 通讯作者:
    初沢清隆
鳥取大学研究成果リポジトリ
鸟取大学研究成果库
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
非標準的オートファジーLAP (LC3-associated phagocytosis) に関連するMORN2は、ユビキチン-プロテアソーム系で限定分解される
MORN2 与非典型自噬 LAP(LC3 相关吞噬作用)相关,仅被泛素蛋白酶体系统降解。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    梶江真由;髙橋美紀;森田真矢;櫻井千恵;初沢清隆
  • 通讯作者:
    初沢清隆
ファゴサイトーシスにおけるSNAP-23リン酸化の機能は受容体依存的である
SNAP-23 磷酸化在吞噬作用中的功能是受体依赖性的
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    櫻井千恵;初沢清隆
  • 通讯作者:
    初沢清隆
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Syntaxin11 参与 Toll 样受体 4 的质膜定位
  • DOI:
  • 发表时间:
    2015
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    木下 大生;森田 真矢;櫻井 千恵;初沢 清隆
  • 通讯作者:
    初沢 清隆

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    2006
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    $ 2.75万
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    $ 2.75万
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    1995
  • 资助金额:
    $ 2.75万
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    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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  • 批准号:
    06760300
  • 财政年份:
    1994
  • 资助金额:
    $ 2.75万
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中国仓鼠卵巢细胞腹侧应力纤维中突触体相关蛋白 23kDa (SNAP23) 与非肌肉肌球蛋白 IIA 相互作用的研究
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    2010
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