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神経伝達物質開口放出におけるtomosynの調節機構の解明

阐明 Tomosyn 在神经递质胞吐作用中的调节机制

基本信息

批准号：
15780216
负责人：
初沢清隆
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780216/
关键词：
SNARE 開口放出膜融合 syntaxin 神経細胞

项目摘要

神経伝達物質やホルモンなどの開口放出(exocytosis)は、それらを含む小胞が細胞膜と融合(fusion)することで達成される。近年、融合装置の基本コンポーネント(SNAREタンパク質;小胞側のsynaptobrevinと細胞膜側のsyntaxinとSNAP-25)が明らかになった。tomosynは、syntaxin結合タンパク質として同定されたSNARE複合体の形成を調節する因子の1つで、私たちの研究から、Ca^<2+>やジアシルグリセロールによって細胞膜への結合が調節されていると考えられた。そこで、tomosynを直接制御する因子を明らかにするために全長tomosynをbaitにし、酵母two-hybrid法を用いてスクリーニングを行った。ヒト脳cDNAライブラリーから、一次スクリーニングで複数のクローンを得た。そのうち二次スクリーニングで比較的強い結合活性を示したものは、カルシウム結合蛋白質として報告のあったsorcinをコードするサイズの異なるクローンが3つ、機能のわかっていないKIAA0737が1クローンだった。これらをtomosynと異なったタグを付加させて培養細胞で共発現し、免疫沈降実験により細胞内での結合を調べたところ、この系では特異的な相互作用は検出できなかった。しかし、sorcinがtomosynとCa^<2+>シグナルを結ぶ因子である可能性が考えられるため、現在クロスリンク試薬を用いた細胞内の相互作用の解析、および全長sorcinをGSTとの融合蛋白質として精製しin vitroでの結合実験を進めている。

The release of neurotransmitter substances from the exocytosis is achieved by fusion of cellular membranes. In recent years, the fusion device of the basic protein synthesis (SNARE protein; small cell side synaptobrevin and cell membrane side syntaxin SNAP-25) has become increasingly popular. Tomosyn, syntaxin binding to SNARE complexes is regulated by factors such as Ca <2+>, Ca <2 +>, Ca <3 +>, Ca <4 +>, Ca <4 +>, Ca <5 +>, Ca <6 +>, Ca <7 +>, Ca <6 +>, Ca <6 +>, Ca <7 +>, Ca <6 +>, Ca <6 The yeast two-hybrid method is used to control the growth of yeast cells. The first step is to create a database for the first time. KIAA0737 - 1 is a protein binding protein that binds to a protein. In addition, the immune system can regulate intracellular binding, and specific interactions can be detected in cultured cells. Analysis of intracellular interactions, purification of GST fusion protein in vitro, and the possibility of binding factors in vitro.