小胞体に局在するSyntaxin17の細胞内機能の解明

阐明位于内质网的 Syntaxin17 的细胞内功能

• 批准号: 11760225
• 负责人: 初沢 清隆
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11760225/
• 关键词: 小胞輸送; syntaxin; SNARE; 小胞体; ゴルジ体

私達が最近発見したsyltaxin17(syn17)は、SNAREs(soluble NSF attachment protein receptors)の一つで、小胞体に局在することから蛋白質の小胞輸送に機能することが予想された。そこで本年度は、syn17の小胞体-ゴルジ体間における機能をsyn5(シスゴルジ体に局在)と比較しながら解析した。(1)syn17の過剰発現によるドミナントネガティブ効果i)小胞輸送に機能する蛋白質を培養細胞で過剰発現させるとオルガネラの構造が小胞化し細胞内に分散することが知られている。そこで、syn17を動物培養細胞で発現させたときの小胞体〜ゴルジ体中間区画(ERGIC)〜ゴルジ体の形態を間接蛍光抗体法で調べた。また、コントロールとしてsyn5についても同様に調べた。syn17とsyn5ともに過剰発現によってゴルジ体は分散していた。一方、ERGICはsyn5では変化なかったがsyn17では分散していた。ii)小胞体からの蛋白質輸送への影響。syn17およびsyn5を過剰発現させた細胞における小胞体からの蛋白質の輸送を観察したところ、syn17の場合蛋白質は小胞体にとどまったままで輸送されていなかった。一方、syn5の場合は小胞体からの輸送は正常に起こりsyn5と同じ局在を示した。syn17の過剰発現によって、ゴルジ体から小胞体への輸送が阻害されることにより全体の膜系のバランスが壊れた結果と考えられた。(2)抗syn17抗体を用いた免疫沈降実験ラット肝臓の全膜画分を可溶化し、抗syn17抗体による免疫沈降実験を行い、小胞体-ゴルジ体間のSNAREs(Sec22b,membrinとrbet1p)との相互作用を各抗体でウエスタンプロット法により調べた。抗syn5抗体で免疫沈降を行ったところ、以前の報告通りSec22b,membrinとrbet1ともに結合していたが、syn17はSec22bのみと結合していた。これは、syn17が機能する際にsyn5とは異なった複合体を形成することを示唆するものである。以上の結果から、syn17が小胞体-ゴルジ体の小胞輸送に関与すること、またsyn5とは異なったステップで機能することが明らかになった。

Recently, I have heard about syltaxin17 (syn17), SNAREs (soluble NSF attachment protein receptors), and the bureau of small cell bodies are trying to make sure that the protein is sent to the small cells. This year, syn17 cell-to-body mass transfer machine (syn5) is used to compare the performance of microsomal and microsomal bodies. (1) syn17 screening results show that microcytopathic acid delivery is effective in the production of microcytopathic acid. The cell culture of syn17 animal culture showed that there were small cell bodies, small cell bodies, small I don't know. I don't know. The syn17 syn5 message filter shows that there are significant differences in the distribution of data. One party, ERGIC, syn5, syn17, disperse, disperse, and change. Ii) the protein of small cell body was transported by microsomal protein. Syn17, syn5, protein, protein, protein and protein. On the one hand, the syn5 closes the small cell body and sends it to the normal. The syn5 is shown in the same office. The results of the syn17 test show that the microsomal bodies of the whole membrane system are affected and the results are not correct. (2) the whole membrane of anti-syn17 antibody was divided into soluble antibody, anti-syn17 antibody antibody and anti-syn17 antibody. The interaction between small cell body and small cell body (Sec22b) was detected by enzyme linked immunosorbent assay. The anti-syn5 antibody immunoprecipitation was used to detect the immune response, the previous report was passed through the Sec22b, the anti-rbet1 antibody was combined with the immune response, and the syn17 antibody Sec22bund antibody was combined with the immune response. Both the syn17 and the syn5 machine are able to detect the presence of a complex to form a complex that indicates that the virus is in the wrong position. The results of the above results show that the syn17 small cell body-the small cell body, the small cell, the small cell, the