クリミア・コンゴ出血熱ウイルスの細胞侵入過程を要因とする病原性発現機序の解明

克里米亚-刚果出血热病毒细胞侵袭过程致病机制的阐明

• 批准号: 20K07516
• 负责人: 櫻井 康晃
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K07516/
• 关键词: CCHFV; シュードタイプウイルス; 複数のウイルス株; 宿主細胞侵入; 膜融合; 抗血清; ダニ; シュードウイルス; 細胞侵入過程; 表面糖タンパク質; 病原性; 侵入阻害剤; クリミア・コンゴ出血熱ウイルス; 病原性発現機序; 治療標的

本研究では、最近我々が開発した水疱性口炎ウイルス（VSV）由来の粒子核とクリミア・コンゴ出血熱ウイルス（CCHFV）由来の表面糖タンパク質を持つシュードウイルスを用いて、表面糖タンパク質依存的な細胞侵入過程を要因とする病原性発現機序を解明することを目指している。昨年度から作製を続けていた種々のCCHFVのウイルス株（ダニから分離された株も含む）由来の表面糖タンパク質を発現するプラスミドを用いて、シュードウイルスの作製に成功した。また、CCHFVに近縁のハザラウイルス（HAZV）由来の表面糖タンパク質を発現するプラスミドを新たに作製し（ヒト細胞発現用にコドンを最適化）、その表面糖タンパク質を持つシュードウイルスを効率よく産生する方法も開発した。また、共同研究者より分与して頂いたCCHFVに対する中和抗体の効果を、CCHFV Hoti株由来の表面糖タンパク質を持つシュードウイルスを用いて評価した結果、濃度依存的に感染を阻害することが認められた。一方、HAZV由来の表面糖タンパク質を持つシュードウイルスの感染は上記の中和抗体で阻害されなかったことから、それはCCHFV特異的に作用する抗体であることが分かった。CCHFVやHAZVはダニを介して宿主間を伝播することが知られており、ダニにおける複製メカニズムや各ウイルス株間の違いについてはほぼ未解明である。そこで、CCHFVを媒介するマダニ（Hyalomma属）由来の細胞を入手し、培養方法の最適化を行った。また、その細胞にHAZVを感染させたところ、少なくとも３か月間は細胞毒性を示さずに持続感染することが分かった。今後も感染細胞の長期培養を継続し、特に表面糖タンパク質に着目したウイルスの性状解析を実施する予定である。

This study aims to elucidate the pathogenesis of hemorrhagic fever (CCHFV) by exploring the use of surface-carbohydrate-dependent particle nuclei derived from vesicular stomatitis (VSV) and the mechanisms underlying surface-carbohydrate-dependent cellular invasion. In the past year, the production of CCHFV was successfully carried out in the field of surface sugar production. In addition, a new method for controlling the generation of surface carbohydrate derived from CCHFV (HAZV)(optimization of surface carbohydrate for cell generation) and a new method for generating surface carbohydrate derived from HAZV (HAZV) are developed. CCHFV neutralising antibody effect, CCHFV Hoti strain origin, surface carbohydrate resistance, and concentration dependent infection resistance On the one hand, HAZV derived from surface sugar, the quality of its infection, the number of neutralizing antibodies, the resistance to CCHFV-specific antibodies, and so on. CCHFV HAZV is the only one who knows how to communicate between hosts. CCHFV medium was used to optimize the culture method and cell origin of Hyalomma. HAZV infection in cells, cell toxicity, cell toxicity In the future, long-term culture of infected cells will be carried out in a predetermined manner, especially in the analysis of their surface characteristics.

项目成果

Public Health England(英国)

英国公共卫生

Development of an efficient entry assay for Crimean-Congo hemorrhagic fever virus to identify novel entry inhibitors

开发克里米亚-刚果出血热病毒的有效进入测定法以鉴定新型进入抑制剂

• 发表时间: 2021
• 作者: 浦野 誠;磯村 まどか;樋口 佳代子;谷川 真希;長尾 俊孝;加藤 拓;河原 明彦;秋葉 純;野上 美和子;山元 英崇;谷口愛樹，中村佳司，後藤恭宏，李謙一，大岡唯祐，小椋義俊，大西真，伊豫田淳，林哲也;山田 峻，上杉憲幸，伊藤勇馬，鈴木正通，杉本 亮，刑部光正，栁川直樹，佐藤 孝，松本主之，菅井 有;Yasuteru Sakurai
• 通讯作者: Yasuteru Sakurai

ペプチド模倣技術を用いたエボラ出血熱治療薬候補の開発

利用拟肽技术开发埃博拉出血热候选治疗药物

• 发表时间: 2022
• 作者: Hasegawa;A.;Murata;M.;Fujikawa;T.;Nagano;Y.;Akari;H.;Kannagi;M;櫻井 康晃
• 通讯作者: 櫻井 康晃

イギリス公衆衛生庁/ロンドン大学衛生熱帯医学大学院/リバプール大学(英国)

英国公共卫生/伦敦卫生与热带医学学院/利物浦大学（英国）

新型コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９）を治療及び／又は予防する方法、医薬

用于治疗和/或预防新型冠状病毒感染（COVID-19）的方法和药物

• 发表时间: 2020