C型肝炎ウイルスの感染初期過程の分子機構

丙型肝炎病毒早期感染过程的分子机制

• 批准号: 14021057
• 负责人: 松浦 善治
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021057/
• 关键词: HCV; 感染機構; リセプター; シュードタイプウイルス; 細胞融合

C型肝炎は今や我が国の国民病であり、キャリヤーの発症予防やウイルスの積極的な排除法の確立が強く望まれている。我々はこれまでに、細胞培養系のないC型肝炎ウイルス(HCV)の感染の初期過程を解析するため、HCVのエンベロープ蛋白質を粒子表面に被ったシュードタイプウイルス及びレポーター遺伝子の活性を指標とする高感度な細胞融合検出系を構築した。これらのアッセイ系により、HCVは蛋白リセプターを介したエンドサイトーシスによって細胞内へ侵入し、それには二つのエンベロープ蛋白質が必須であることを明らかにした。また、これまでHCVのリセプターではないかと考えられていたCD81以外の蛋白リセプターの存在が示唆された。本研究は、これらのアッセイ系を用いて感染の第一段階である肝細胞への吸着に関与する細胞膜受容体とその遺伝子を解明し、HCV感染の初期過程を分子レベルで明らかにすることを目的とする。本年度は、シュードタイプウイルスのHepG2細胞への感染様式を詳細に検討し、以下の成績を得た。1.HCVシュードタイプウイルスのHepG2細胞への吸着はヘパリンによって阻害されたが、逆に感染は増強されることが明らかとなった。このことはHCVシュードタイプウイルスの吸着には硫酸多糖類が重要であるため、ヘパリン添加によって結合阻害が観察されるが、それ以降の膜融合や侵入過程でHCVシュードタイプウイルスのエンベロープ蛋白質の活性発現をヘパリンが増強している可能性が示唆される。2.ヘパリン処理で感染の増強が観察されたことから、活性発現にヘパリンを要求する線維芽細胞成長因子(FGF)、上皮細胞成長因子、および肝細胞成長因子等の各種成長因子のHCVシュードタイプウイルスの感染への影響を調べた。その結果、FGF添加でのみ有意にHCVシュードタイプウイルスの感染抑制が観察された。3.HCVは血液媒介ウイルスであるため、感染の場にヒト血液成分が必要ではないかと考えた。そこで各種動物血清のシュードタイプウイルスの感染における影響を調べたところ、ヒト血清が濃度依存的にHCVシュードタイプウイルスの感染性を増強することが示された。

Hepatitis C は や today I の が countries national disease で あ り, キ ャ リ ヤ ー の 発 disease to prevent や ウ イ ル ス の positive な の exclusions looking establish strong が く ま れ て い る. I 々 は こ れ ま で に, cell culture の な い hepatitis C ウ イ ル ス (HCV) infection の の early process analytical す を る た め, HCV の エ ン ベ ロ ー プ protein を に particle surface is っ た シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス and び レ ポ ー タ ー heritage 伝 son を の activity index と す る Gao Gan degree 検 out な cell fusion is を build し た. こ れ ら の ア ッ セ イ department に よ り, HCV は protein リ セ プ タ ー を interface し た エ ン ド サ イ ト ー シ ス に よ っ て in cells へ intrusion し, そ れ に は two つ の エ ン ベ ロ ー プ protein が must で あ る こ と を Ming ら か に し た. ま た, こ れ ま で HCV の リ セ プ タ ー で は な い か と exam え ら れ て い た CD81 outside の protein リ セ プ タ ー の is が in stopping さ れ た. は, this study こ れ ら の ア ッ セ を イ department with い て の first Duan Jie で あ る hepatocellular へ の sorption に masato and す る membranes by let body と そ の posthumous son 伝 を interpret し, HCV infection early の process を molecular レ ベ ル で Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. This year は, シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の HepG2 cells へ の infected others type を detailed に beg し 検, the following の achievements を た. 1. HCV シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の HepG2 cells へ の sorption は ヘ パ リ ン に よ っ て resistance against さ れ た が, strong inverse に infection は raised さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の こ と は HCV シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の sorption に は polysaccharide sulfate が important で あ る た め, ヘ パ リ ン add に よ っ て combining resistance against が 観 examine さ れ る が, そ れ with や の membrane fusion process of intrusion で HCV シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の エ ン ベ ロ ー プ protein の activities 発 now を ヘ パ リ ン が raised strong し て い が る possibility Sot される. 2. ヘ パ リ ン 処 Richard で infection の raised strong が 観 examine さ れ た こ と か ら, active 発 now に ヘ パ リ ン を requirements す る line d bud cell growth factor (FGF), epithelial growth factor, お よ び hepatocyte growth factor の の various growth factors such as HCV シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の infection へ の influence を adjustable べ た. そ の results, FGF add で の み intentionally に HCV シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の infection inhibition が 観 examine さ れ た. 3.HCV <s:1> blood vector ウ が スであるため スであるため, infection site にヒト blood components が necessary で な な な と と to study えた. そ こ で various animal serum の シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の infection に お け る influence を adjustable べ た と こ ろ, ヒ ト が concentration dependent に serum HCV シ ュ ー ド タ イ プ ウ イ ル ス の infectious を raised strong す る こ と が shown さ れ た.

项目成果

Tsutsumi T.: "Alteration of intrahepatic cytokine expression and AP-1 activation in transgenic mice expressing hepatitis C core protein"Virology. 304. 415-424 (2002)

Tsutsumi T.：“表达丙型肝炎核心蛋白的转基因小鼠肝内细胞因子表达和 AP-1 激活的改变”病毒学。

Tsutsumi T.: "Interaction of hepatitis C virus core protein with retinoid X receptor a modulates its transcriptional activity"Hepatology. 35. 937-946 (2002)

Tsutsumi T.：“丙型肝炎病毒核心蛋白与类视黄醇 X 受体 a 的相互作用调节其转录活性”肝病学。

Ishii K.: "Structural analysis of vaccinia virus DIs strain : Application as a new replication-deficient viral vector"Virology. 302. 433-444 (2002)

Ishii K.：“痘苗病毒 DIs 株的结构分析：作为新的复制缺陷病毒载体的应用”病毒学。

Burioni R.: "Diverging effects of human recombinant anti-hepatitis C virus (HCV) antibody fragments derived from a single patient on the infectivity of a vesicular stomatitis virus/HCV pseudotype"Journal of Virology. 76. 11775-11779 (2002)

Burioni R.：“来自单个患者的人重组抗丙型肝炎病毒（HCV）抗体片段对水泡性口炎病毒/HCV假型感染性的不同影响”病毒学杂志。

Aizaki H.: "Expression profiling of liver cell lines expressing entire-or parts of hepatitis C virus open reading frame"Hepatology. 36. 1431-1438 (2002)

Aizaki H.：“表达整个或部分丙型肝炎病毒开放阅读框的肝细胞系的表达谱”肝病学。