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新型コロナウイルス研究のためのαウイルスベクターを構築基盤とした実験系の確立

基于甲病毒载体的新型冠状病毒研究实验体系的建立

基本信息

批准号：
21K08490
负责人：
田中淳
金额：
$ 2.33万
依托单位：
Osaka Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではSARS-CoV-2の抗体の中和活性や標的細胞のウイルス感受性をP2施設で安全に評価するためのSARS-CoV-2のスパイク蛋白質を持つシュードタイプウイルスを標識アルファウイルスベクターを用いて作製することを目的とし、アルファウイルス粒子上に発現できるCoV2-S蛋白質の構造を検討している。昨年度に試作した、SARS-CoV-2のS蛋白質発現ベクターと標識アルファウイルスベクターとを用いて作製したSARS-CoV-2シュードタイプウイルスは、アルファウイルス膜蛋白質発現ベクターを使用して作製した場合のおよそ１万分の１程度の力価であり、ほとんどシュードタイプウイルスが産生されないことが明らかとなった。今回SARS-CoV-2の細胞質ドメイン領域にアルファウイルスであるチクングニアウイルスの膜蛋白質の細胞質ドメインを置換・融合させて作製したさまざまな組換えS蛋白質を２０種類以上作製し、それらがシュードタイプウイルス粒子上に取り込まれ、感染性を有するシュードタイプウイルスを形成できるか検討を試みた。しかしながら試みた組換えS蛋白質の全てでシュードタイプウイルスを回収することができず、アルファウイルスベクターゲノムを内包するカプシドタンパク質にウイルス外被膜としてアルファウイルス以外のウイルス膜蛋白質を持つ細胞膜を被せることに本質的な問題がある可能性も考えられた。このことを踏まえアルファウイルスベクターゲノムをカプシドタンパク質を介さずにSARS-CoV-2のS蛋白質を持つ細胞膜を被せる形で形成されたシュードタイプウイルス作製を試みたところ、アルファウイルス膜蛋白質で作製した場合の５分の１程度の感染性（力価）のシュードタイプウイルスを作製することに成功した。現在はこのアルファウイルスベクターゲノムをさらに改良し高力価のシュードタイプウイルス作製を試みている。

In this study, we evaluated the sensitivity of SARS-CoV-2 antibody to neutralizing activity in target cells to P2 administration, and investigated the structure of SARS-CoV-2 protein. In the past year, SARS-CoV-2 S protein production has been tested and used to control SARS-CoV-2 membrane protein production. In the case of use, it has a strength of 10,000 to 10,000. In this paper, SARS-CoV-2 cytoplasmic protein domain is divided into three parts: cytoplasmic protein domain, cytoplasmic protein domain, cytoplasmic protein In addition to the above, the study of the possible nature of the protein composition of S protein in the envelope. The S protein of SARS-CoV-2 was successfully produced in the form of a cell membrane. The S protein of SARS-CoV-2 was successfully produced in the form of a cell membrane. Now, we are trying to improve the quality of the products.