組換えVSVを用いたC型肝炎ウイルスの感染機構の解明

使用重组VSV阐明丙型肝炎病毒的感染机制

• 批准号: 05J09374
• 负责人: 谷 英樹
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J09374/
• 关键词: C型肝炎ウイルス(HCV); シュードタイプウイルス; 組換えウイルス; 水疱性口内炎ウイルス; レセプター; VSV; CD81; FGFR5; 細胞指向性

これまでC型肝炎ウイルス(HCV)の感染に関与する多くの受容体候補分子が報告されているが、その役割は十分に解明されていない。また、限定された細胞株でのみ複製可能なHCVの増殖系(JFH1株)が確立されたが、未だ臨床サンプルからHCVを分離できる培養細胞系はない。そこで、HCVエンベロープ蛋白質を一過性に水庖性口内炎ウイルス(VSV)に被らせたシュードタイプVSV(HCVpv)や、その遺伝子をゲノムに組み込んだ組換えVSV(HCVrv)を作製し、HCVの感染機構を解析した。各種遺伝子型のHCVエンベロープ蛋白質をもつHCVpvとHCVrvを各種動物細胞で作製し、ウイルス粒子の性状と感染性を解析した。また、グルコシダーゼの阻害剤であるDeoxynojirimycin(DNJ)とマンノシダーゼの阻害剤であるDeoxymannojirimycin(DMJ)を用いて、HCVエンベロープ蛋白質の糖鎖修飾の感染性に及ぼす影響を検討した。HCVrvはHCVpvと同様に、293T細胞やHuh7細胞で作製するとHuh7細胞に高い感染性を示すが、BHK細胞やHeLa細胞では感染性を示すウイルスは回収できなかった。HCVpvやHCVrvはhCD81やE2エンベロープ蛋白質に対する抗体やC型肝炎患者血清で中和された。また、Huh7細胞やHep3B細胞ではHCVrvの感染の拡大が観察されたが、他の細胞では二次感染は観察されなかった。小胞体でハイマンノース型の糖鎖合成を阻害するDNJ処理により、HCVrvの感染性は濃度依存的に減少した。一方、ゴルジ装置でマンノースのトリミングを阻害するDMJ処理では感染性の減少は認められなかった。JFH1株の感染も同様の薬剤感受性を示した。HCVpvやHCVrvのHuh7細胞への感染には、これまでに報告されているシュードタイプレトロウイルスやJFH1株と同様に、エンベロープ蛋白質のハイマンノース型の糖鎖構造が重要であることが示唆された。シュードタイプウイルスやJFH1株と比べ、HCVrvは様々な細胞でウイルスを作製できる利点があるため、産生細胞に依存したウイルスの感染性の検討が可能である。

This is a list of receptor candidate molecules associated with hepatitis C virus (HCV) infection. The HCV clone (JFH1 strain) was established and isolated from a limited number of cell lines. The HCV protein is responsible for the control of transient aqueous endostomatitis (VSV) and the analysis of HCV infection mechanisms. Analysis of HCV infection characteristics and infectivity in various animal cells To investigate the infectivity of HCV glycoproteins and the effects of HCV glycoproteins on the activity of Deoxynojirimycin (DNJ) and HCV glycoproteins. HCVrv is similar to HCVpv, 293T cells, Huh7 cells, BHK cells and HeLa cells. HCVpv and HCVrv neutralize hCD81 and E2 proteins and sera from hepatitis C patients. Huh7 cells and Hep3B cells were found to be infected with HCVrv, and other cells were found to be infected with HCVrv. The infectivity of HCVrv decreased in a concentration-dependent manner due to the inhibition of glycogen synthesis in small cells. The DMJ process reduces infectivity by reducing the number of infections. JFH1 strain has been shown to be susceptible to infection by the same agent. HCVpv and HCVrv Huh7 cells infected with the same strain JFH1 and the same strain JFH1 and HCVrv protein were reported to be important for the formation of the glycan chain. JFH1 strain and HCVrv are resistant to cell infection.

项目成果

シュードタイプと組換え水疱性口内炎ウイルスを用いたC 型肝炎ウイルスの感染機構の解析

丙型肝炎病毒假型和重组水泡性口炎病毒感染机制分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 谷英樹;菰田泰正;鈴木健介;山下哲生;稲田大彦;森石恆司;考藤達哉;林紀夫;松浦善治
• 通讯作者: 松浦善治

Replication-competent recombinant vesicular stomatitis virus encoding hepatitis C virus envelope proteins

• DOI: 10.1128/jvi.00608-07
• 发表时间: 2007-08-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Tani, Hideki;Komoda, Yasumasa;Matsuura, Yoshiharu
• 通讯作者: Matsuura, Yoshiharu

蛋白質核酸酵素増刊 ウイルス研究の現在と展望 C型肝炎ウイルスの細胞侵入機構

蛋白核酸酶专刊病毒研究现状与展望丙型肝炎病毒细胞侵袭机制

• 发表时间: 2007
• 作者: 谷 英樹;松浦善治
• 通讯作者: 松浦善治

Oligomerization of Hepatitis C virus protein is crucial for interaction with the cytoplasmic domain of E1 envelope protein.

丙型肝炎病毒蛋白的寡聚化对于与 E1 包膜蛋白胞质结构域的相互作用至关重要。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Virology 80
• 作者: K.Nakai;T.Okamoto;T.Kimura-Someya;K.Ishii;C.-K.Lim;H.Tani;E.Matsuo;T.Abe;Y.Mori;T.Suzuki;T.Miaymura;J.H.Nunberg;K.Moriishi;Y.Matsuura
• 通讯作者: Y.Matsuura

Characterization of HCV-like particles produced in a human hepatima cell line by a recombinant baculovirus

重组杆状病毒在人肝癌细胞系中产生的 HCV 样颗粒的表征

• 发表时间: 2006
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications 340
• 作者: Eiko Matsuo;Hideki Tani;Chang-kweng Lim;Yasumasa Komoda;Toru Okamoto;Hironobu Miyamoto;Kohji Moriishi;et al.
• 通讯作者: et al.