Measurement and mechanical modeling of cellular nano-actuator responsible for cell invasion

负责细胞侵袭的细胞纳米致动器的测量和机械建模

基本信息

  • 批准号:
    20K12622
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.83万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2020
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2020-04-01 至 2021-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究では、がん細胞などが組織内に浸潤する際に形成される細胞小器官のナノスケールでの三次元形状を個々の構成要素構造タンパク質の局在位置や個数、および滞在間の計測とともに明らかにする。かつ力学解析によってその細胞内荷重支持構造物としての機能 - 具体的には、構成要素を通してアクチン細胞骨格を突出させたときに生じる細胞外基質からの荷重をポドソーム構造物全体に分配し、 動的安定を保ちつつその機能を果たすことができるか - を定量的に評価する。研究初年度においては、主にポドソーム構造を可視化するためのサンプル作りとその評価を行った。ポドソームを構成する構造タンパク質と蛍光タンパク質の遺伝子が融合した遺伝子を発現するプラスミドベクターの構築を行った。効率よく実験を進めるために、ポドソーム研究でよく用いられているラット胎生血管平滑筋株A7r5細胞株に対してプラスミドベクターをリポフェクション法により遺伝子導入し、抗生物質による選択を行うことで安定発現株を樹立した。上記と並行して、蛍光タンパク質標識したポドソーム構成タンパク質を一過性発現させた細胞に対して、共焦点レーザー顕微鏡を用いた光褪色後蛍光回復法(FRAP法)で構造タンパク質の分子交換速度(滞在・結合時間)の計測を行った。その結果、タンパク質によって異なる分子交換速度を有していることを確認した。今後、原子間力顕微鏡によるポドソーム構造の高解像度イメージング、構造タンパク質の変異体を用いてポドソームの動的構造調節機構の解明、これらの結果を合わせて力学的な説明を行う予定であったが、研究代表者の転職に伴う科研費申請資格喪失のため研究初年度でもって本課題を廃止とする。
This study explores the three-dimensional infiltration of cells into tissues and the formation of cells in small organs. The shape is the component element, the structure is the quality, the position is the number, and the time is the measurement of the time.かつMechanical Analysis によってその Cell Load Support Structure としての Function - Specific には and constituent elements を通してさせたときに生じる Extracellular matrix からのload をポドソームThe whole structure is distributed に, The stability of the movement and the function of the movement are the same as the functions of the movement. In the early years of research, the main structure and visual structure of the year were studied.ポドソームを CONSTRUCTIONがfusionした缝子を発行するプラスミドベクターのconstruct を行った. Efficiency of よく実験を入めるために, ポドソーム research でよく いられているラットviviform vascular smooth tendon strain A7r5 cell strain に対してプラスミドベクターをリポフェクション法により伝子 Importし, antibiotics are selected and selected, and the stable and stable strains are established. The above mentioned is a parallel pattern, a し光タンパクquality mark is a したポドソーム constitutes a タンパク性をtransient 発appears させたcell に対して, a confocal レーザーThe micromirror is used to measure the molecular exchange rate (retention and binding time) of the structural material using the photorecovery method after fading (FRAP method).そのRESULTS, タンパクqualityによってdifferentなるmolecule exchange speedを有していることをconfirmationした. From now on, the high-resolution micromirror structure of the interatomic force will be The structural adjustment mechanism of the タンパクquality の変variant を いてポドソームのmovable structure adjustment mechanism is explained and これらのRESULTS を合わせて Mechanical explanations を行う定であったが、Research representative の転 Position I lost my qualifications for applying for scientific research funds and my research project was terminated in the first year of my research.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
大阪大学大学院基礎工学研究科 出口研究室ホームページ
大阪大学大学院工学研究科出口实验室主页
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    0
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  • 通讯作者:
    出口 真次

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