悪性細胞に特有の細胞基質間接着構造の分子構築と機能解析

恶性细胞特有的细胞基质粘附结构的分子构建和功能分析

• 批准号: 06281238
• 负责人: 祖父江 憲治
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06281238/
• 关键词: 細胞骨格; 動的接着部; 辺縁接着部; 収縮蛋白質; カルデスモン; プロモーター解析

ガン細胞あるいは悪性形質転換細胞における接着構造の機能とこれを構成するアクチン系細胞骨格の機能及び制御機能を明らかにすることは、がンの転移浸潤機構を理解するうえで重要である。本研究では、正常線維芽細胞とラウス肉腫ウイルスにより形質転換した細胞を比較することにより、形質転換細胞では運動性に富む動的接着部と静的な辺縁接着部の2種類の接着部位が形成されること、および動的接着部にはアクチン、ミオシン、カルデスモン(CaD)、トロポミオシンなどの収縮蛋白質が集積されることを見い出した。しかしながら、CaDは、正常細胞に比較して腫瘍細胞で発現量が著名に低下していた。この様な組織、細胞特異的なCaDの発現機構を解析するため、すでにクローニングずみのプロモーター領域をCAT遺伝子の上流に挿入したプラスミド及びこれ由来の一連の欠失変異プラスミドを構築した。これらのプラスミドを分化型形質を維持した平滑筋初代培養細胞及び脱分化型平滑筋細胞にトランスフェクションし、CATアッセイを行った。同様の解析をびHeLa細胞を用いておこなった。また、ゲルシフトアッセイによりDNAと核蛋白質の相互作用を解析した。その結果、CaDプロモーターは分化型平滑筋細胞において高い転写活性を示した。脱分化型平滑筋細胞では転写活性は抑制を受け前者の70〜40%程度であった。HeLa細胞での転写活性はさらに低く分化型平滑筋細胞における活性の10%以下であった。これらの結果はそれぞれの細胞でのCaD蛋白質の発現量と一致しており、CaDの組織特異的な発現は転写レベルで制御されていることが明らかになった。この分化型平滑筋細胞特異的な転写促進は転写開始部位の上流-309〜300に位置するCArGbox様配列(CCAAAAAAGG)に依存しており、この配列と前後6bpを含む配列CArG1と特異的に結合する核蛋白質が平滑筋細胞核抽出液中に存在することを見出した。以上の結果、このCArGbox様配列はCaDの平滑筋特異的な発現を制御している唯一のシス因子であることが明かになった。さらにガン細胞でCaD遺伝子のプロモーター解析を行い、転写制御の違いやガン細胞での転写抑制の要因を明らかにする必要がある。

ガ ン cells あ る い は 悪 sex form quality planning in cell に お け る then construct の function と こ れ を constitute す る ア ク チ ン cell bone の function and び royal function を Ming ら か に す る こ と は, が ン の planning move infiltrating institutions を understand す る う え で important で あ る. This study で は, normal line d bud cells と ラ ウ ス meat swollen ウ イ ル ス に よ り form quality planning in し た cells を compare す る こ と に よ り, form quality planning in cell で は motility に rich む move then department と static な 辺 try then department の 2 kinds の が then parts forming さ れ る こ と, お よ び move then department に は ア ク チ ン, ミ オ シ ン, カ ル デ ス モ ン (Ca D) トロポ な シ シ な な <s:1> <s:1> が set of condensed proteins される が とを とを とを とを see とを exit た た. The comparison of the occurrence of <s:1> て abscess cells で, が and に with CaD ながら and normal cells に shows that に is more famous and に is lower. こ の others な tissue, cell specific な CaD の 発 institutions now を parsing す る た め, す で に ク ロ ー ニ ン グ ず み の プ ロ モ ー タ ー field を CAT son survived 伝 の upper に scions into し た プ ラ ス ミ ド and び こ れ origin の の owe loss in a row - different プ ラ ス ミ ド を build し た. こ れ ら の プ ラ ス ミ ド を differentiated form quality を maintain し た cultured cells and smooth muscle in the early generation び smooth muscle cell dedifferentiation type に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し, CAT ア ッ セ イ を line っ た. Similarly, for をびHeLa cells, を is used with をび てお なった なった. Youdaoplaceholder0, ゲ によ シフトアッセ シフトアッセ によ <s:1> DNAと nucleon-protein <s:1> interaction を analysis た. The そ <s:1> results, CaDプロモ プロモ タ タ タ <s:1> <s:1> <s:1> high <s:1> 転 writing activity を of differentiated smooth fascia cells にお て て showed that を た た The activity of dedifferentiated smooth fascia cells で 転 転 is inhibited を by け to 70 to 40 percent であった. HeLa cells で 転 転 write activity さらに さらに low く differentiated smooth tendon cells における activity <e:1> less than 10% であった. こ れ ら の results は そ れ ぞ れ の cells で の CaD protein の 発 now と consistent し て お り, CaD の tissue specific な 発 は now planning to write レ ベ ル で suppression さ れ て い る こ と が Ming ら か に な っ た. こ の differentiated smooth muscle cell specific な planning write promote は planning to write start parts の upper position - 309 ~ 300 に す る CArGbox others with column (CCAAAAAAGG) に dependent し て お り, こ の match column contains 6 bp を む match column before and after と CArG1 と specific に combining す る nuclear protein が smooth muscle cell nucleus に exist in the extract す る Youdaoplaceholder0 とを see exit た. の above results, こ の CArGbox others go は CaD の smooth muscle specific な 発 now を suppression し て い る only の シ ス factor で あ る こ と が Ming か に な っ た. さ ら に ガ ン cells で CaD heritage 伝 son の プ ロ モ ー タ ー parsing を line い い, planning to write royal の spare や ガ ン cells で の planning write inhibit の by を Ming ら か に す る necessary が あ る.

项目成果

Yano,H.: "Identification of two distinct promoters in the chicken caldesmon gene." Biochemi.Biophys.Res.Commun.201. 618-626 (1994)

Yano,H.：“鸡 caldesmon 基因中两个不同启动子的鉴定。”

Yoshida,K.: "Reperfusion of rat heart after brief ischemia induces proteolysis of calspectin(Non-erythroid spectrin or fodrin)by calpain." Circulation Res.(in press). (1995)

Yoshida, K.：“大鼠心脏短暂缺血后的再灌注会诱导钙蛋白酶对钙观蛋白（非红系血影蛋白或胞质蛋白）进行蛋白水解。”

Inui,M.: "Annexin VI binds to a synaptic vesicle protein,synapsin I." J.Neurochem.63. 1917-1923 (1994)

Inui,M.：“Annexin VI 与突触小泡蛋白突触蛋白 I 结合。”

Tanaka,J.: "Cell/substratum adhesion and movement of cultured rat astrocytes." Dev,Brain Res.(in press). (1995)

Tanaka,J.：“培养的大鼠星形胶质细胞的细胞/基质粘附和运动。”