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悪性細胞に特有の細胞基質間接着構造の分子構築と機能解析

恶性细胞特有的细胞基质粘附结构的分子构建和功能分析

基本信息

批准号：
06281238
负责人：
祖父江憲治
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ガン細胞あるいは悪性形質転換細胞における接着構造の機能とこれを構成するアクチン系細胞骨格の機能及び制御機能を明らかにすることは、がンの転移浸潤機構を理解するうえで重要である。本研究では、正常線維芽細胞とラウス肉腫ウイルスにより形質転換した細胞を比較することにより、形質転換細胞では運動性に富む動的接着部と静的な辺縁接着部の2種類の接着部位が形成されること、および動的接着部にはアクチン、ミオシン、カルデスモン(CaD)、トロポミオシンなどの収縮蛋白質が集積されることを見い出した。しかしながら、CaDは、正常細胞に比較して腫瘍細胞で発現量が著名に低下していた。この様な組織、細胞特異的なCaDの発現機構を解析するため、すでにクローニングずみのプロモーター領域をCAT遺伝子の上流に挿入したプラスミド及びこれ由来の一連の欠失変異プラスミドを構築した。これらのプラスミドを分化型形質を維持した平滑筋初代培養細胞及び脱分化型平滑筋細胞にトランスフェクションし、CATアッセイを行った。同様の解析をびHeLa細胞を用いておこなった。また、ゲルシフトアッセイによりDNAと核蛋白質の相互作用を解析した。その結果、CaDプロモーターは分化型平滑筋細胞において高い転写活性を示した。脱分化型平滑筋細胞では転写活性は抑制を受け前者の70〜40%程度であった。HeLa細胞での転写活性はさらに低く分化型平滑筋細胞における活性の10%以下であった。これらの結果はそれぞれの細胞でのCaD蛋白質の発現量と一致しており、CaDの組織特異的な発現は転写レベルで制御されていることが明らかになった。この分化型平滑筋細胞特異的な転写促進は転写開始部位の上流-309〜300に位置するCArGbox様配列(CCAAAAAAGG)に依存しており、この配列と前後6bpを含む配列CArG1と特異的に結合する核蛋白質が平滑筋細胞核抽出液中に存在することを見出した。以上の結果、このCArGbox様配列はCaDの平滑筋特異的な発現を制御している唯一のシス因子であることが明かになった。さらにガン細胞でCaD遺伝子のプロモーター解析を行い、転写制御の違いやガン細胞での転写抑制の要因を明らかにする必要がある。

ガン Cells あるいは悪 morphological changes of cells における and then structure の function とこれを constitute するアクチン system cell bone It is important to understand the function of the grid and the control function and the infiltration mechanism of the structure. In this study, a comparison was made between the morphological changes of normal fibroblasts and normal cells. There are 2 types of ることにより, morphologically changing cells, movable and rich joints, and quiet joints. Similar joints are formed by the joints such as the joints of the されること and the movable joints of the にはアクチン, the ミオシン, and the カルデスモン(CaD), トロポミオシンなどの shrinkage protein が集されることを见い出した. It is known that the amount of cancer cells, CaD, and normal cells is relatively low. Tissue and cell-specific CaD detection mechanism analysis Domain をCAT legacy 伝子の上にINSERT したプラスミド and びこれ arise の一连のowed loss変different プラスミドをconstruct した.これらのプラスミドをdifferentiated morphology maintenance した smooth muscle primary culture cells and び detachment Differentiated smooth tendon cells, CAT muscle cells, and CAT muscle cells. The same analysis method is used for HeLa cells. Analysis of the interaction between DNA and nuclear proteins. The results showed that the CaD-containing differentiated smooth tendon cells had high writing activity. The activity of dedifferentiated smooth tendon cells is inhibited by 70 to 40%. The activity of HeLa cells is low and the activity of differentiated smooth tendon cells is less than 10%.これらのRESULTS はそれぞれのCell でのCaD protein の発existing と consistence しており、C aD's tissue-specific な発成は転writes レベルでcontrolされていることが明らかになった.このDifferentiated smooth tendon cell-specific な転秘stimulation は転写start site upstream -309~300にCArGbox様alignment (CCAAAAAAGG)にDepends on the 6bp sequence of the sequence and the sequence of CArG1, and the specific binding sequence of CArG1 is present in the nucleic acid extract of smooth tendon cells. As a result of the above, the CArGbox 様aligned CaD smooth muscle specific な発appears and controls the unique のシス factor であることが明かになった.さらにガン Cell でCaD 缝子のプロモーターANALYSIS を行い、転WRITING The reason for the suppression of the cell's resistance is the necessary reason for the suppression.