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ZTTK症候群の知的障害発症機構解明を目指した核内蛋白質SONの機能解析

核蛋白SON的功能分析旨在阐明ZTTK综合征智力障碍的发病机制

基本信息

批准号：
20K16876
负责人：
上田昌史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Aichi Medical University (2022)National Center of Neurology and Psychiatry (2020-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の解析には、内在性Son(ZTTK症候群の原因遺伝子SONのマウスホモログ)遺伝子の発現を低下させたモデルを作製する必要がある。Crispr/Cas9を用いたゲノム編集技術によるモデルマウス樹立の実験が、今年度も引き続き実施困難であった。本年度は国内学会に参加して研究遂行に必要な情報を収集し、細胞モデル作製を計画し実験の準備を開始した。当初の計画を変更し、マウス由来の神経細胞における内在性Sonの発現をshRNAノックダウンベクター導入により発現低下させ、内在性Sonノックダウン細胞を作製し、代替モデルとすることにした。shRNAノックダウンベクターは作製した代替モデルを用いて、以後のSon標的遺伝子群の遺伝子発現解析を行い、研究遂行する方法を計画した。今後は1年間補助事業期間を延長し、延長期間内に以下の内容を計画している。1. in vitro系を用いた細胞モデルの作製実験：マウス由来神経細胞株にshRNAノックダウンベクターをリポフェクション法により遺伝子導入する。遺伝子導入細胞を試料とするが、導入効率が低い場合はFACS (fluorescence-activated cell sorting)でGFPを指標としてSonノックダウン神経細胞をソーティングし試料とする。2. 細胞モデルを用いた遺伝子発現変化の検証実験：1で得られた細胞を試料とし、定量PCRを実施する。この時、SON標的遺伝子群であり、かつ知的障害原因遺伝子またはシナプス形成関連の遺伝子群に着目しそれらの発現量を定量する。またノックダウン効率の異なる２種類のノックダウンベクターを使用し、ノックダウン効率の違いによるこれら遺伝子群の発現量変化の差の有無や、発現変化を受ける遺伝子の違いの有無を検証する。

This study analyzed the necessity of controlling the occurrence of intrinsic Son(ZTTK syndrome) gene. Crispr/Cas9 is used in the compilation of technical issues, such as the implementation of this year's implementation difficulties. This year, we will participate in the research and preparation of the necessary information collection and cell production plan. The original plan was to change the expression of intrinsic Son from the neurons in which it originated. shRNA was introduced to the neurons in which it originated. The expression of intrinsic Son was reduced. shRNA is used to control and replace RNA, and the method for analyzing the gene expression of the target RNA group is planned. In the future, the subsidy period will be extended for one year, and the following contents will be planned during the extended period. 1. In vitro, the gene expression system was introduced into the cells by shRNA from the neural cell line. In the case of FACS (fluorescence-activated cell sorting), GFP is an indicator of the presence and absence of DNA in the cells. 2. Detection of DNA in cell culture: 1. Detection of DNA in cell culture and quantitative PCR This time, the SON target group is identified, the cause of the damage is identified, and the occurrence of the associated group is quantified. The difference between the two types of the occurrence rate and the occurrence rate is used, the difference between the occurrence rate and the occurrence rate of the group is detected, and the occurrence rate of the group is detected.