Development of analytical methods of cfDNA in body fluid for early cancer diagnosis

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様々な疾患に関連する多数のバイオマーカーが既に発見され、がん、呼吸器や神経系などの疾患に精密医療を提供するために、バイオマーカーの測定が医療現場で行われている。大きながん組織に成長する前の1000個程度のがん細胞が放出した微量なバイオマーカーを検出し、がんの場所、進行度、有効な医薬品を判定することができれば、これまで以上にバイオマーカーを活用した診断の利用が広まると期待される。また、生体の深部に存在する病変の状態をバイオマーカーで評価することができれば、個々の患者さんに適した薬物療法の提案につながると期待されている。バイオマーカーの中でもcfDNAは、高感度なリアルタイムPCR法や優れた配列解析法である次世代シーケンサー（NGS）等の利用により、今では、検体中に10コピー程度のcfDNAが存在すれば、標的cfDNAの検出や配列解析が可能になっている。検体中に極わずかなcfDNAが存在すれば診断できるため、検体中の標的核酸の絶対量や存在確率を増やし、それらを確実に精製し、検出することで、早期診断が実現すると考えた。これまでに、生体内に存在する微量なcfDNAの検出を目指し、尿中cfDNAの簡易精製法の開発を試み、尿に存在するcfDNAを汎用のPCRとゲル電気泳動によって検出した。今年度は、より微量のcfDNAを簡便に短時間に検出するために、高感度なRT-PCRを利用し、DNAの検出を試み、現時点で数100コピー程度のcfDNAの検出に成功した。また、尿中のバイオマーカの測定として、TDM対象薬物のバンコマイシンの測定法を開発した。