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モノリティック型カラムを用いたCEC法による生体試料の分離分析法の確立

整体柱CEC法生物样品分离分析方法的建立

基本信息

批准号：
13771359
负责人：
加藤大
金额：
$ 1.28万
依托单位：
University of Shizuoka
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771359/
关键词：
キャピラリー電気クロマトグラフィーマイクロチップゾルーゲル反応生体分子ハイスループットスクリーニングモノリス構造ナノ構造分子認識逆相分離用固定相ソルーゲル反応生理活性物質光重合マイクロチップ電気泳光学分割

项目摘要

昨年度は、マイクロ・ナノメートルスケールで構造が制御されたモノリティック体を合成し、その微細構造の最適化を行うことで優れた分離能を示すモノリティック型カラムの作製に成功した。しかしながら生体成分のような極性の高い化合物の分析に利用すると、モノリティック体表面に存在するシラノール基に極性の高い化合物が吸着してしまうため、ピークのテーリングが観察され、良好な分離を得ることができなかった。そこで今年度は、シラノール基を減少させるために、表面を化学修飾することにした。化学修飾には、ジメチルオクタデシルクロロシラン(1)とクロロトリメチルシラン(2)とを用いた。1と2の双方で化学修飾したモノリティック型カラムが、最も優れた分離能を示した。修飾したカラムを用いて、ラットの脳脊髄液中のアミノ酸分析を行った結果、5分程度でGlnとSerの測定を行うことができた。さらにモノリティック型カラムにナノメートルサイズの空間を作製し、その中にタンパク質を包含させることに成功した。生理的な条件下でカラムを作製すると、包含されたタンパク質はその構造や活性を保持していた。実際にウシ血清アルブミンを固定化したカラムでは、アルブミンに親和性を持つ化合物ほど、カラムに強く保持された。さらにトリプシンを固定化したカラムでは、トリプシンによる消化反応に引き続いて、原料と生成物との分離を1本のカラムで行うことに成功した。このタンパク質の包含法は、様々な形状の空間にタンパク質を包含することができ、実際にマイクロチップ上にもタンパク質を固定化し、その機能を発現することに成功した。

Last year, the structure of the system was successfully synthesized, and the fine structure of the system was optimized. The analysis of high polar compounds in organic components is carried out by adsorption, detection and good separation of high polar compounds in organic surfaces. This year, the base is reduced, and the surface is chemically modified Chemical modification is used in the following ways: (1) and (2). 1. Chemical modification of the two sides, the optimal separation of the two sides The results of acid analysis in the serum were analyzed by using the modified acid and the modified acid. The space of the media is controlled, and the quality of the media is included. Under physiological conditions, the structure and activity of the plant are maintained. In fact, the serum is immobilized, the affinity is maintained, and the affinity is maintained. Immobilization, digestion, and separation of raw materials and products were successful. The method of inclusion of the material in the space of the shape is successful in immobilizing the material in the space of the shape and realizing the function of the material.