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バイオアクティブペプチド界面を利用したミグラソームの機能解析

使用生物活性肽界面进行迁移体的功能分析

基本信息

批准号：
21H01726
负责人：
大河内美奈
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H01726/
关键词：
ペプチド細胞小胞細胞遊走遊走生体膜小胞ミグラソーム

项目摘要

本研究は、細胞がその移動の軌跡を示すようにリトラクションファイバーの交点などに形成する大きさ１μm程度の生体膜小胞であるミグラソームの機能解析を目的とする。本年度は、ミグラソームが基板上に形成されるという点に着目し、ミグラソームを安定に捕捉することができるペプチド界面を設計し、これをミグラソーム機能解析プラットフォームとして利用することとした。種々のインテグリンリガンドや生体膜親和性ペプチドをスポット合成法によりセルロース膜上に合成し、細胞と相互作用させることでミグラソームを捕捉する候補配列を選抜した。その後、選抜ペプチドを修飾したグラス基板上に細胞を播種し、その遊走能およびミグラソーム形成数を評価し、ミグラソームの捕捉に使用するペプチド配列を決定した。これらの結果、ミグラソーム形成やリトラクションファイバーの形成に有効なペプチド配列は、細胞種により異なることが示唆された。また、膜4回貫通型の膜タンパク質であるテトラスパニン4がミグラソーム膜に高発現するという知見から、緑色蛍光タンパク質とT2A-mCherryを融合したテトラスパニン4安定発現株を構築した。細胞イメージングにより、リトラクションファイバーおよびミグラソームにテトラスパニン4が高発現しリアルタイムイメージングが可能であること、ミグラソームには細胞質成分が内包されることを確認した。さらに、ペプチド修飾基板を用いた細胞遊走によるミグラソーム形成、細胞剥離による基板からのミグラソーム分画に関する諸条件について検討し、近接する細胞との情報伝達機能の解析に向けた要素技術を構築した。

The purpose of this study is to demonstrate the trajectory of cell movement and analyze the function of cell movement by forming small cells of 1μm in size at the intersection of cell movement and cell movement. This year, we will focus on the design and utilization of the system interface for the purpose of improving the stability of the system. The method of synthesis of the species and the selection of the candidate sequences for the capture of the cell membrane affinity After the selection, the selection and arrangement of cells seeded on the substrate, the number of cells formed and the number of cells captured are evaluated. The results of this study include the following: 1. the formation of a complex system, 2. the formation of a complex system, 3. the formation of a complex system, 4. the formation of a complex system, 5. the formation of a complex system, and 4. the formation of a complex system. The film 4-loop penetration type film quality is high, and the green light is high. The film quality is T2A-mCherry. The film 4-loop penetration type film quality is high. Cell types are identified by cell types, cell types and cell types. Cell types are identified by cell types and cell types. Cell types are identified by cell types and cell types. In addition, the conditions for cell migration, cell separation, substrate separation, and cell information transmission function analysis were established.