Reconstitution of implantation process with primate endometrial organoid

灵长类子宫内膜类器官重建植入过程

• 批准号: 22K19247
• 负责人: 依馬 正次
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19247/
• 关键词: 着床; 霊長類; カニクイザル; 子宮

研究項目1：カニクイザル子宮内膜オルガノイドを用いた人工着床系の構築これまでに我々は、ヒト子宮内膜生検サンプルからオルガノイドを作製することに成功し、エストラジオール、プロゲステロンなどのホルモン添加によって内膜が肥厚することを確認した。さらに、分泌期の子宮内膜に遺伝子レベルで類似しているかどうか、RNA-seq解析を実施し、遺伝子発現の類似性を評価した。また、カニクイザル子宮からオルガノイドの樹立を行い、ヒトと同条件で作製できることを確認した。ラミニン抗体染色などにより、基底膜の存在などを含めて確認した。分泌期のカニクイザル子宮内膜細胞に類似した状態に分化するかどうか、RNA-seq解析により遺伝子発現比較を実施した。研究項目２：着床初期の接着・浸潤過程に寄与する分子機構を解明するヒト着床に関わる候補遺伝子群は、胚性因子・子宮因子・免疫因子を含めると数百以上知られているものの、ヒト生体レベルでの機能的実証はされていない。そこで本研究項目では、それらの候補遺伝子のうち、（１）胚側の遺伝子、（２）接着・浸潤に関わる膜タンパク質をコードする候補遺伝子についてsgRNAを設計し、Cas9タンパク質とともに受精卵に導入することでノックアウト胚盤胞を作出する予定である。今年度は、候補遺伝子の選出のところまで行った。

Project 1: Construction of an artificial implantation system for endometrial hyperplasia in women and women was successfully performed, and endometrial hyperplasia was confirmed. In addition, the secretion of endometrial DNA is similar to that of RNA-seq analysis, and the similarity of DNA development is evaluated. The first step is to establish the first step, and the second step is to confirm the first step. The presence of basement membrane was confirmed by antibody staining. The secretion phase of endometrial cells is similar to the state of differentiation, RNA-seq analysis, and gene expression comparison. Research project 2: molecular mechanism analysis of early implantation and infiltration process, candidate gene subgroup, embryonic factor, uterine factor and immune factor, including more than hundreds of knowledge of early implantation and biological function. This research project includes: (1) embryo side gene;(2) subsequent infiltration related gene candidate gene;(3) design of sgRNA;(4) introduction of Cas9 gene into zygote; and (5) preparation of blastoderm cells. This year, the candidate is selected.