Development of the novel therapy for NAFLD by Engineering Fatty Liver from iPS cells

点击翻译按钮获取中文摘要

iPS細胞よりPNPLA3遺伝子の野生型からCRISP技術を用いて、PNPLA3の遺伝子配列の1塩基配列を変え、変異株の作成に成功した。この変異株は、他の遺伝子配列については、全く同じ配列であることを確認しているので、この２つのiPS細胞の違いはこの1塩基配列のちがいから起こるものであると考えられる。iPS細胞を６日間、成長因子と培養することで、星細胞に分化させることに成功した。この作成した星細胞を免疫染色およびq PCRにて遺伝子発現を検討すると、星細胞のマーカーであるαSMAやCollagen１の発言を認め、野生株および変異株にてその発現では差を認めず、を作成した。野生株および変異株ともに星細胞へ分化させて、星細胞マーカーの発現を検討したところ、分化に差は認めなかった。分化後の二つの細胞をTGFにて刺激すると、変異株の星細胞が強く活性化し、増殖速度も速くなることがわかった。さらに、変異株はCollagen１の発現が高くなり、線維化マーカーの発現が高くなった。２つの細胞株をRNAシークエンスを行うと、変異株の星細胞において、肝線維化に関わる線維化マーカーや、炎症性サイトカインの発生に関わる遺伝子の発現が高くなることがわかった。変異株の星細胞にて、IL-6の遺伝子発現が高くなることがわかった。IL-6は炎症性サイトカインにて、星細胞での線維化に関わっていることがわかっており、変異株の培養液中のIL-6を測定すると、発現量が高くなっていることがわかった。以上より、変異株の星細胞は、野生株よりもより強く活性化し、線維化に関わる遺伝子群の発現が高く、IL-6の炎症性サイトカインが高くなることがわかった。