サルコイドーシスの病態形成に及ぼすエクソソーム内包マイクロRNAの作用の解明

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当該年度はサルコイドーシス疾患モデルとしてマクロファージ細胞株（RAW264.7）をリポ多糖とコンカバリンＡで刺激した肉芽腫モデル(Yanagishita T et al.,Arch Dermatol Res. 2007)を用いてRNAシークエンスおよびリアルタイムRT-PCRにより同定された２種類の候補miRNAの疾患における役割を明らかにするための実験を行った。未刺激の細胞株（RAW264．7）と肉芽腫モデルの両方に候補miRNAの塩基配列を模倣したオリゴヌクレオチドおよび候補miRNAと相補的な配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入し、候補miRNAの過剰発現およびノックダウンを行い、その影響を対照（スクランブルオリゴ導入）と比較した。さらには患者血清試料および非罹患者血清試料から採取したエクソソームを添加する実験も行い、細胞の表現型への影響を評価した。結果の評価方法としてギムザ染色にて多核巨細胞の割合を算出した。さらには肉芽腫形成に関与するサイトカインとしてIL-12およびTNF-α産生量を細胞培養上清からELISA法により測定した。結果として、模倣オリゴ、アンチセンスオリゴ、患者由来エクソソーム、非罹患者由来エクソソームのいずれを添加した場合においても多核巨細胞形成率・サイトカイン産生に対する有意な影響は観察されなかった。これまでの結果より、候補miRNAは患者由来エクソソームおよび肉芽腫モデルの両方で発現は増加していたものの、それ自体がエクソソームによる伝達を介してサルコイドーシスにおいて肉芽腫形成を引き起こす作用を有することを示すデータは得られなかった。