プロテオーム解析を用いた慢性虚血性疼痛の機序解明と患者病態に沿った動物モデル確立

利用蛋白质组分析阐明慢性缺血性疼痛的机制并建立符合患者病理的动物模型

基本信息

批准号：
19K18477
负责人：
苅部綾香
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、本研究のメインテーマである、慢性虚血性疼痛マウスモデルの確立を行った。既存のマウスモデルでは、虚血開始後からの血流低下が顕著すぎるために、早期で下肢が壊死もしくは脱落することや、個体間でのばらつきの大きさが生じることで、ヒトにおける慢性虚血性下肢虚血における慢性疼痛のモデルとは大きくかけ離れていることが問題となっていた。この問題点を解決するために、ヒトの臨床症状に合致するような慢性下肢虚血性疼痛モデルマウスの確立を目指して、様々な週齢のBalb/c nu/nuを用いて各種下肢動脈および静脈の結紮・離断などを行い、約10種類ほどの条件を振り分けて検討を行った。今年度の研究の結果、１２週齢以降のマウスの大腿の栄養動脈の一部切除を行うことで、既存のマウスモデルのように虚血後１週間以内に大腿部まで壊死が起こってしまうことを防ぎ、なおかつ長期間の血流低下を維持できることを見出した。また、虚血により誘引される慢性疼痛の有無を解析するために、von Frey試験法を用いて、虚血後の疼痛発現を確認した。以上の結果から、本マウスを慢性虚血性疼痛モデルマウスとして以降の実験に用いることとした。今後は、慢性虚血性疼痛発症時に起こる様々な遺伝子発現変化の解析を行うとともに、タンパク質の発現変化についても解析を行いたいと考え、慢性虚血性疼痛モデルマウスの脊髄、脳、下肢などの組織サンプルの採取に加え、血液、脳脊髄液サンプルの回収を行い、プロテオーム解析を行っていく予定である。

今年，我们建立了慢性缺血性疼痛的小鼠模型，这是这项研究的主题。在现有的小鼠模型中，缺血发作后的血流量降低过于明显，导致早期阶段坏死或从下肢脱落，以及个体之间的变化幅度，使其与人类慢性缺血性下肢缺血的慢性疼痛模型截然不同。为了解决这个问题，我们的目的是在慢性下肢缺血性疼痛中建立小鼠模型，该模型与人类的临床症状相匹配，并使用各种年龄的BALB/C NU/C NU/C NU/C NU绑扎和传播了各种下肢和静脉，并进行了大约10个条件的研究。今年的研究表明，通过部分去除12周大的小鼠大腿的营养动脉，在缺血的一周内对大腿的坏死，可以预防现有的小鼠模型，并且可以长时间维持血液流动。此外，为了分析缺血引起的慢性疼痛的存在或不存在，使用了冯·弗雷测试方法来确认缺血后的疼痛发生。基于上述结果，该小鼠在随后的实验中用作慢性缺血性疼痛的模型。将来，我们希望分析当慢性缺血性疼痛发作时发生的各种基因表达变化，还分析蛋白质表达的变化，我们计划收集血液和脑脊液样品，除了从脊髓，大脑和慢性缺血性疼痛模型模型的慢性缺血性疼痛和进行蛋白质组分析外收集组织样品外，还要收集组织样品。