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ウイルス由来エピソーマルRNAを用いた革新的幹細胞遺伝子治療ベクターの創出

使用病毒衍生的附加型 RNA 创建创新的干细胞基因治疗载体

基本信息

批准号：
20H00662
负责人：
朝長啓造
金额：
$ 28.95万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

代表者が開発した世界初のエピソーマル型RNAウイルスベクターであるREVecは、一本鎖マイナス鎖RNAウイルスであるボルナ病ウイルスを基盤とした革新的な遺伝子治療用ベクターである。REVecの特色は、細胞周期を通して染色体に局在することで、分化する幹細胞においても持続的な遺伝子発現が可能な点にある。本研究は、REVecの実用化に向けての安全性を実証することを目的に、REVecと染色体との相互作用を構造的そして生化学的に解析することを目的に実施された。本年度はREVecの核内での基礎性状を明らかにする目的で、以下の研究項目についての解析を行った。「研究項目1：REVec-染色体相互作用に関与する分子機構の解明」においては、REVecの染色体局在の分子機序の解明を目的に、REVec を導入した培養細胞からクロマチン免疫沈降（ChIP）法によりREVec-クロマチン複合体を回収した。「研究項目2：凍結光電子相関顕微鏡を用いたREVec-染色体の結合構造解析」では、REVec 染色体局在の構造レベルでの解析を目標に、REVec持続導入ヒトオリゴデンドロ培養細胞の樹立を行った。また「研究項目：エピソーマルRNA の細胞エピゲノムへの影響の解明」では、REVec 持続導入による幹細胞エピゲノム状態を把握するために、REVec導入iPS細胞の調製を実施した。本研究課題は重複受給制限のために本年度で終了することとなった。

The representative opened the world's first-class RNAi RNAs that were used for the first time in the world, such as the REVec, and a copy of the book that was used to treat the disease in the first place in the world, and a book that was used to treat the disease. REVec "characteristics", "cell cycle", "chromosomes", differentiation, differentiation and differentiation. In this study, the purpose of this study was to analyze the purpose of biochemistry, which was created by REVec chromosome interaction and REVec chromosome interaction. This year, the basic traits in the nucleus of REVec are clearly defined, and the following research items are analyzed. "Research item 1 REVec- REVEC-chromosome interaction assay and molecular mechanism explanation", REVec chromosome Bureau was used to identify the purpose of molecular sequence analysis, and REVec gene was introduced into the cell to express the recombinant protein immunoprecipitation (ChIP) method to detect the REVec- DNA complex. "Research item 2: optical Microanalysis using REVec- chromosome combination Analysis", the REVec chromosome Bureau is responsible for the analysis of the target tag and the REVec program in the laboratory. The research project: information, RNA, data, information, information, The project of this study has been seriously affected by the system. This year, we have been successful in this year's study.