中分子OX40アゴニスト開発における抗腫瘍活性評価法の確立

中分子OX40激动剂抗肿瘤活性评价方法的建立

• 批准号: 20J22500
• 负责人: 家村 知樹
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J22500/
• 关键词: シングルドメイン抗体; ナノボディ; OX40; アゴニスト抗体; VHH

2021年度までは、有望VHHクローンの同定と、in vitroでのVHHの抗腫瘍効果を確認した。具体的には、初代培養T細胞を使ったシングルドメイン抗体(VHH)刺激による細胞増殖能、サイトカイン産生能のスクリーニング解析で有望VHH-479クローンを同定した。キメラ抗原受容体遺伝子導入T細胞(CAR-T)とB細胞性リンパ腫細胞株(FL218)をVHH存在下で共培養し、VHH刺激により細胞傷害活性が増強されることを確認した。2022年度はin vivoでのVHHのアゴニスト活性を解析した。まず、VHH-479を三量体(トリマー)化し、OX40安定発現Jurkat細胞株を使ったreporter assayで、VHHトリマーがプレート上への固相化を必要とせず液相の状態でOX40シグナルを活性化できることを確認した。また、VHH-479トリマーに抗マウスアルブミンVHHをつなげることで、マウス体内でのVHHの半減期を1.1hから48hに延長することができた。ルシフェラーゼ安定発現FL218細胞株を作成し、マウス体内で増殖するFL218細胞の腫瘍量をIVISシステムで定量化できるようにした。マウスにルシフェラーゼ発現FL218細胞株を投与し、CAR-TとVHH-479の組み合わせによりin vivoで抗腫瘍効果を増強できるか調べるため、腫瘍やCAR-T、VHHの投与タイミング、投与量等の条件を最適化した。現在実験の条件は固定され、マウスモデルでの実験を繰り返し、データを収集しているところである。マウスモデルでVHH-479がCAR-Tの抗腫瘍活性を増強することを確認できれば、今後ヒトでのCAR-T療法の成績向上につながることが期待される。

In 2021, it is expected that the anti-tumor effect of VHH will be confirmed in vitro Specific analysis of cell proliferation and cell production by primary culture T cells stimulated by antibodies (VHH) is expected to be consistent with VHH-479. It was confirmed that T cells (CAR-T) and B cell line (FL218) were co-cultured with VHH and that the cytotoxicity was enhanced by VHH stimulation. In 2022, the analysis of VHH activity in vivo was carried out. VHH-479 trisomy, OX40 stable Jurkat cell line reporter assay, VHH-479 trisomy, OX40 stable Jurkat cell line solid phase, OX-479 trisomy, OX-479 stable Jurkat cell line solid phase, OX-479 stable Jurkat cell line, OX- VHH-479 has a half-life of 1.1h and 48h in vivo. FL218 cell line was established and cultured in vivo. The tumor volume of FL218 cell line was quantified by IVIS. FL218 cell line was found in vivo. The combination of CAR-T and VHH-479 was optimized for the enhancement of anti-tumor effect. Now the conditions are fixed, and they're fixed. VHH-479 is expected to enhance CAR-T anti-tumor activity in the future.