亜鉛輸送担体に着目した脳卒中後遺症に関わるミクログリア極性転換の制御機構の解明

以锌转运蛋白为中心阐明中风后遗症相关小胶质细胞极性转换的控制机制

• 批准号: 19J23044
• 负责人: 新武 享朗
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kochi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J23044/
• 关键词: ミクログリア; 亜鉛トランスポーター; 亜鉛

本年度は、マウス由来ミクログリア細胞株BV-2におけるM2/M1極性転換に対する細胞外Zn2+の影響について調べるため、BV-2にM2誘導薬であるIL-4と同時にZnCl2を18時間処置後、細胞を洗浄した。その後、M1極性誘導薬であるリポ多糖（LPS）の24時間処置によりM2/M1極性転換を誘導し、M1極性マーカーである炎症性サイトカイン量についてELISA法により検討した。その結果、ZnCl2処置によって炎症性サイトカイン量が減少していた。次に、M2ミクログリアにおける亜鉛トランスポーター遺伝子の発現変化について調べたところ、IL-4添加12時間後にZIP12遺伝子の発現量がコントロール群と比して著明に増加していた。そこで、siRNAを用いてBV-2のZIP12をノックダウン（KD）した。ZIP12 KD BV-2に対して細胞内Zn2+指示薬であるFluoZin-3AMを用いてM2ミクログリアにおける細胞内Zn2+動態について検討した。その結果、scRNA処置群ではZnCl2添加によってFluoZinシグナルが増加したのに対して、siRNA処置群ではFluoZinシグナルの増加が認められなかった。最後にZIP12 KD BV-2におけるM2/M1極性転換に対する細胞外Zn2+の影響について調べるため、BV-2にIL-4とZnCl2を同時に処置し、IL-4処置18時間後に細胞を洗浄した。その後、LPSの24時間処置によりM2/M1極性転換を誘導し、炎症性サイトカイン量についてELISA法により検討した。その結果、ZIP12 KDによってZnCl2による炎症性サイトカイン分泌抑制効果が減弱した。以上の知見から、細胞外Zn2+がZIP12を介して細胞内に取り込まれ、M2/M1極性転換後の炎症性サイトカイン分泌を抑制していることが示唆された。

This year, the cell lines BV-2 and M2/M1 were treated for 18 hours, and the cells were washed with ZnCl2. After 24 hours of treatment, M1 polarity induced polysaccharide (LPS) induced M2/M1 polarity change, M1 polarity induced inflammatory response, ELISA method As a result, the amount of ZnCl2 in the treatment of inflammatory cells decreased. In addition, M2 was added 12 hours later, ZIP12 was added, and the amount of ZIP12 was increased compared with M2. The use of BV-2 and ZIP12 in siRNA is also known as KD. ZIP12 KD BV-2 is used to detect intracellular Zn2+ dynamics. As a result, the scRNA treatment group was increased by ZnCl2 addition, and the siRNA treatment group was increased by FluoZinc addition. Finally, ZIP12 KD BV-2, IL-4 and ZnCl2 were treated simultaneously with BV-2, IL-4 and ZnCl2, and the cells were washed after 18 hours of treatment with IL-4. After treatment, LPS was detected by ELISA in 24 hours after induction of M2/M1 polarity shift and inflammatory response. As a result, ZIP12 KD and ZnCl2 decreased inflammatory secretion inhibition. These findings suggest that extracellular Zn2 + and ZIP12 may be involved in the inhibition of inflammatory cell secretion after M2/M1 polarity switch.

项目成果

The brain ischemia in the dark period reduces ischemia-induced zinc toxicity via EAAC1 expression.

黑暗期脑缺血通过 EAAC1 表达减少缺血引起的锌毒性。

• 发表时间: 2019
• 作者: Aratake T;Higashi Y;Hamada T;Shimizu T;Shimizu S;Zou S;Yamamoto M;Nagao Y;Nakamura R;Akizawa T;Saito M
• 通讯作者: Saito M

Brain nitric oxide induces facilitation of the micturition reflex through brain glutamatergic receptors in rats

脑一氧化氮通过脑谷氨酸受体诱导大鼠排尿反射的促进

• DOI: 10.1002/nau.24440
• 发表时间: 2020
• 期刊: Neurourology and Urodynamics
• 影响因子: 2
• 作者: Ono Hideaki;Shimizu Takahiro;Zou Suo;Yamamoto Masaki;Shimizu Yohei;Aratake Takaaki;Hamada Tomoya;Nagao Yoshiki;Shimizu Shogo;Higashi Youichirou;Saito Motoaki
• 通讯作者: Saito Motoaki

亜鉛増悪化M1ミクログリアはP2X7受容体を介したアストロサイト食作用を抑制する

锌增强M1小胶质细胞抑制P2X7受体介导的星形胶质细胞吞噬作用

• 发表时间: 2021
• 作者: 寺西 悠;浅沼 宏;安水洋太;田中伸之;武田利和;松本一宏;森田伸也;小坂威雄;水野隆一;大家基嗣;東洋一郎，新武享朗，濱田朋弥，清水孝洋，清水翔吾，Zou Suo，山本雅樹，中村里菜，秋澤俊史，齊藤源顕
• 通讯作者: 東洋一郎，新武享朗，濱田朋弥，清水孝洋，清水翔吾，Zou Suo，山本雅樹，中村里菜，秋澤俊史，齊藤源顕

The neuroprotective role of EAAC1 in hippocampal injury following ischemia-reperfusion

EAAC1在缺血再灌注后海马损伤中的神经保护作用

• DOI: 10.1254/fpj.20069
• 发表时间: 2021
• 期刊: Folia Pharmacologica Japonica
• 作者: Higashi Youichirou;Aratake Takaaki;Shimizu Shogo;Shimizu Takahiro;Saito Motoaki
• 通讯作者: Saito Motoaki

一過性脳虚血再灌流後の海馬におけるZn2+集積はEAAT3日内変動によって制御される

短暂性脑缺血再灌注后海马中 Zn2+ 的积累受 EAAT3 昼夜变化控制

• 发表时间: 2021
• 作者: 新武享朗;東洋一郎;清水孝洋;清水翔吾;Zou Suo;中村里菜;秋澤俊史;齊藤源顕
• 通讯作者: 齊藤源顕