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Screening for the Origin of Halichondrin B

软海绵素 B 来源的筛选

基本信息

批准号：
19K05720
负责人：
上村大輔
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019 至 2020
项目状态：
已结题

项目摘要

クロイソカイメン破砕液を対象に抗オカダ酸抗体による免疫染色を行い、フローサイトメトリー(FCM)で蛍光を示すセルを回収した。蛍光顕微鏡観察で2種類の微生物(真菌及び複数バクテリアによるバイオマット)を確認した。固定せずに免疫染色する手法を開発し、真菌Aの単離・培養に成功した。真菌培養液抽出物をTLC展開後、抗オカダ酸抗体でプレートごと免疫染色した所、複数バンドを認めたが、オカダ酸は確認できず、真菌Aの染色は交差性によると判明した。また真菌A抽出物からは新規化合物を単離・構造決定した。一方、FCMの2つの隣り合う検出器の数値をプロットして、蛍光特有の波長を持つ群ごとに分析した結果、蛍光パターンの異なる2群を確認した。エタノール抽出物をtof-MS解析し、1群にオカダ酸のピークを認めた。次にゲノムを抽出し次世代シーケンスで解析し、オカダ酸を検出した微生物群画分を大きさと蛍光強度を基準に4分割した。蛍光強度が高く分子直径の小さい画分と、蛍光強度が弱く分子直径の大きな画分それぞれからゲノムを抽出し菌相を比較した結果、後者は多様な微生物から成り、最大グループは未同定生物由来遺伝子(55%)で、真菌由来遺伝子は2%だった。前者は未同定微生物由来遺伝子が80%を占め、真菌由来遺伝子は0.02%以下であり、この未同定微生物がオカダ酸の生物オリジンと考えられる。ユニバーサルプライマーで16SrRNAのクローニングを行った所、γプロテオバクテリアStenotrophomonas属と相同性を示す新規微生物が圧倒的優占種であり、18SrRNAの増幅は確認できなかった。この新規プロテオバクテリアが上記未同定微生物であり、オカダ酸の生物オリジンである可能性を示している。ハリコンドリンの生物オリジン探索では、ノルハリコンドリンAをクロイソカイメン抽出物より精製し、カルボキシル基にスペーサーを付加した。

The immune system is designed to detect the presence of anti-tumor antibodies, and to detect the presence of tumor cells. Microscopic examination of two species of microorganisms (fungi and multiple species) confirmed The method of immunostaining was successfully developed and the culture of fungi A was successfully carried out. After the fungal culture extract was developed by TLC, the anti-acid antibody was detected by immunostaining, and the fungal A was detected by immunostaining. Fungi A extract is a new compound. One side, FCM's 2 neighboring detector's number value, fluorescence's unique wavelength, analysis results, fluorescence's 2 different groups confirmed The extract was analyzed by tof-MS, and the group 1 was identified. The next generation of microbiota was analyzed, and the next generation of microbiota was analyzed. The results showed that the latter was more diverse than the microbial origin, and the largest number of organisms (55%) and fungi (2%) were different. The former accounts for 80% of the total number of microorganisms, while the latter accounts for less than 0.02%. 16S rRNA gene expression was detected by PCR, and 18S rRNA gene expression was detected by PCR. This new regulation is based on the possibility of identifying microorganisms and acids. The biological activity of the protein is detected by the enzyme, and the protein is extracted by the enzyme.

项目成果

期刊论文数量（17）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

フローサイトメトリーを用いたオカダ酸生物オリジンの探索

使用流式细胞术寻找大田酸的生物起源

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
阿部孝宏;内藤隆之;上村大輔
通讯作者：
上村大輔

未使用資源と医薬

未使用的资源和药品

DOI：
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
0
作者：
NAKANO;Mikito; HANASHIMA;Shinya; HARA;Toshiaki; KABAYAMA;Kazuya; FUKASE;Koichi; MURATA;Michio; ANDO;Hiromune; SUZUKI;Kenichi G. N.; SLOTTE;J. Peter;友田　千尋・矢野　陽・花島　慎弥・村田　道雄・London　Erwin;上村大輔
通讯作者：
上村大輔

抗肥満薬リードの開発

抗肥胖药物先导化合物的开发

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
Shiho Sato;Ferry Ferdiansyah Sofian;Wataru Suehiro;Desi Harneti;Rani Maharani;Unang Supratman;Fajar Fauzi Abdullah;Supriatno Salam;Takuya Koseki;Yoshihito Shiono;上村大輔
通讯作者：
上村大輔

抗骨粗鬆症医薬リードNorzoanthamine類の誘導体化

抗骨质疏松药物衍生化药物 Norzoanthamines