The establishment of an innovative method for isolation of tumor endothelial cells (TECs) supporting the growth of tumor and the application to cancer therapy

建立支持肿瘤生长的肿瘤内皮细胞（TEC）分离创新方法及其在癌症治疗中的应用

• 批准号: 19K09054
• 负责人: 藤田 寿一
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09054/
• 关键词: 腫瘍血管内皮細胞; VE-cadherin promoter; がん微小環境; 血管新生阻害; VE-Cadherin; トランスジェニック・マウス

本研究では、癌に特有な微小環境下に存在する腫瘍内血管内皮細胞において正常な血管内皮細胞と比較して生物学的特性が異なることに着目し、選択薬剤耐性遺伝子およびEGFPを血管内皮細胞において特異的に発現するトランスジェニック・マウス（TGマウス）を作製した後、そのTGマウスを利用して効率的に純度の高い腫瘍血管内皮細胞を分離・培養し腫瘍血管内皮細胞に対してのみ、生物活性阻害効果を示す低分子化合物のスクリーニングおよびマイクロアレイ法により腫瘍血管内皮細胞において特異的に発現している遺伝子を同定し、その遺伝子産物の機能阻害剤を検索することによって、副作用などのない特異性の高い癌の新規血管新生阻害療法の開発を目的とする。当該年度においては、すでに作製していた血管内皮細胞特異的に発現するマウスVE-Cadherin 遺伝子の発現制御領域（mVEC）の下流に選択マーカー遺伝子（選択薬剤耐性遺伝子およびEGFP）を組み込んだプラスミドに関して、大阪市立大学・医学部の研究支援プラットフォーム・動物実験施設におけるCRISPR-Cas9法を用いるトランスジェニック・マウス（TGマウス）作製法のために、マウスにおいて明白な有害作用を生じず定常遺伝子発現が可能なトランス遺伝子挿入部位、すなわちセーフ・ハーバー部位であるRosa26座位に血管内皮細胞特異的マウスVE-Cadherin 遺伝子の発現制御領域（mVEC）+選択マーカー遺伝子（選択薬剤耐性遺伝子およびEGFP）をノックインするためのコンストラクトを再構築する必要があり、その途中段階である。

In this study, vascular endothelial cells (ECs), normal vascular endothelial cells (VEC), normal vascular endothelial cells (VEC), biological characteristics of vascular endothelial cells (ECs), biological characteristics of vascular endothelial cells (VECs) were detected in this study. The biological characteristics of normal vascular endothelial cells (VECs) were observed in this study. The biological characteristics of normal vascular endothelial cells (VECs) were observed in this study, and the biological characteristics of normal VEC cells and normal vascular endothelial cells were observed in this study. After the detection of vascular endothelial cells (TG), the target cells of vascular endothelial cells (vascular endothelial cells) were selected. The results showed that the low molecular weight compounds (LMCs) were isolated from vascular endothelial cells (VECs). The results showed that the low molecular weight compounds (LMCs), vascular endothelial cells (VEC), vascular endothelial cells (ECs), vascular endothelial cells The sub-machine can prevent the loss of blood vessels and the side effects of the new angiogenesis prevention method for high-level cancer. When the year is in full swing, the vascular endothelial cell is responsible for the detection of vascular endothelial cells. In the field of control (mVEC), the selection of the system (select the tolerance EGFP) is the most important thing. The Department of Medicine, Osaka City University, supported by the research and support of the Department of Medicine, Osaka City University, the construction of the CRISPR-Cas9 method, the use of the TG method, the use of the method, the harmful effects, the location, the location, the The location of the Rosa26 seat, the VE-Cadherin of the vascular endothelial cell, the field of control (mVEC) + the selection of the EGFP (select the tolerance sub-unit of the vascular endothelial cell).

项目成果

Verification of the effects of calcium channel blockers on the immune microenvironment of breast cancer.

验证钙通道阻滞剂对乳腺癌免疫微环境的影响。

• DOI: 10.1186/s12885-019-5828-5
• 发表时间: 2019
• 期刊: BMC Cancer
• 影响因子: 3.8
• 作者: Takada K;Kashiwagi S;Asano Y;Goto W;Takahashi K;Fujita H;Takashima T;Tomita S;Hirakawa K;Ohira M.
• 通讯作者: Ohira M.