The establishment of an innovative method for isolation of tumor endothelial cells (TECs) supporting the growth of tumor and the application to cancer therapy

建立支持肿瘤生长的肿瘤内皮细胞（TEC）分离创新方法及其在癌症治疗中的应用

• 批准号: 19K09054
• 负责人: 藤田 寿一
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09054/
• 关键词: 腫瘍血管内皮細胞; VE-cadherin promoter; がん微小環境; 血管新生阻害; VE-Cadherin; トランスジェニック・マウス

本研究では、癌に特有な微小環境下に存在する腫瘍内血管内皮細胞において正常な血管内皮細胞と比較して生物学的特性が異なることに着目し、選択薬剤耐性遺伝子およびEGFPを血管内皮細胞において特異的に発現するトランスジェニック・マウス（TGマウス）を作製した後、そのTGマウスを利用して効率的に純度の高い腫瘍血管内皮細胞を分離・培養し腫瘍血管内皮細胞に対してのみ、生物活性阻害効果を示す低分子化合物のスクリーニングおよびマイクロアレイ法により腫瘍血管内皮細胞において特異的に発現している遺伝子を同定し、その遺伝子産物の機能阻害剤を検索することによって、副作用などのない特異性の高い癌の新規血管新生阻害療法の開発を目的とする。当該年度においては、すでに作製していた血管内皮細胞特異的に発現するマウスVE-Cadherin 遺伝子の発現制御領域（mVEC）の下流に選択マーカー遺伝子（選択薬剤耐性遺伝子およびEGFP）を組み込んだプラスミドに関して、大阪市立大学・医学部の研究支援プラットフォーム・動物実験施設におけるCRISPR-Cas9法を用いるトランスジェニック・マウス（TGマウス）作製法のために、マウスにおいて明白な有害作用を生じず定常遺伝子発現が可能なトランス遺伝子挿入部位、すなわちセーフ・ハーバー部位であるRosa26座位に血管内皮細胞特異的マウスVE-Cadherin 遺伝子の発現制御領域（mVEC）+選択マーカー遺伝子（選択薬剤耐性遺伝子およびEGFP）をノックインするためのコンストラクトを再構築する必要があり、その途中段階である。

这项研究的重点是与正常内皮细胞相比，在癌症特异性微环境中存在的肿瘤内内皮细胞的生物学特征。 After generating transgenic mice (TG mice) that specifically express selected drug resistance genes and EGFP in vascular endothelial cells, the TG mice are used to efficiently separate and culture tumor vascular endothelial cells, and screen small molecule compounds that exhibit biological activity inhibitory effects only on tumor vascular endothelial cells by microarray methods, and search for function inhibitors of the gene product,从而为没有副作用的高度特异性癌症开发出一种新型的血管生成抑制剂。在今年中，对于结合了小鼠VE-钙粘蛋白基因的表达控制区（MVEC）的可选标记基因（可选的药物耐药性基因和EGFP）的质粒，该基因在血管内皮细胞中是特异性表达的，该基因已在血管内皮细胞中特异性表达，已经产生了用于旋转脉冲型脉冲的脉冲区域所必需的，这是在表达中产生的，这是必要的。 VE-Cadherin gene (selectable drug resistance gene and EGFP) at the Rosa26 locus, a safe harbor site, for the method for creating transgenic mice (TG mice) using the CRISPR-Cas9 method at the research support platform and animal experimental facility of the Osaka City University School of Medicine, where constant gene expression is possible without any obvious adverse effects in mice, that is, the safe harbor site.

项目成果

Verification of the effects of calcium channel blockers on the immune microenvironment of breast cancer.

验证钙通道阻滞剂对乳腺癌免疫微环境的影响。

• DOI: 10.1186/s12885-019-5828-5
• 发表时间: 2019
• 期刊: BMC Cancer
• 影响因子: 3.8
• 作者: Takada K;Kashiwagi S;Asano Y;Goto W;Takahashi K;Fujita H;Takashima T;Tomita S;Hirakawa K;Ohira M.
• 通讯作者: Ohira M.