The establishment of an innovative method for isolation of tumor endothelial cells (TECs) supporting the growth of tumor and the application to cancer therapy

建立支持肿瘤生长的肿瘤内皮细胞（TEC）分离创新方法及其在癌症治疗中的应用

• 批准号: 19K09054
• 负责人: 藤田 寿一
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09054/
• 关键词: 腫瘍血管内皮細胞; VE-cadherin promoter; がん微小環境; 血管新生阻害; VE-Cadherin; トランスジェニック・マウス

本研究では、癌に特有な微小環境下に存在する腫瘍内血管内皮細胞において正常な血管内皮細胞と比較して生物学的特性が異なることに着目し、選択薬剤耐性遺伝子およびEGFPを血管内皮細胞において特異的に発現するトランスジェニック・マウス（TGマウス）を作製した後、そのTGマウスを利用して効率的に純度の高い腫瘍血管内皮細胞を分離・培養し腫瘍血管内皮細胞に対してのみ、生物活性阻害効果を示す低分子化合物のスクリーニングおよびマイクロアレイ法により腫瘍血管内皮細胞において特異的に発現している遺伝子を同定し、その遺伝子産物の機能阻害剤を検索することによって、副作用などのない特異性の高い癌の新規血管新生阻害療法の開発を目的とする。当該年度においては、すでに作製していた血管内皮細胞特異的に発現するマウスVE-Cadherin 遺伝子の発現制御領域（mVEC）の下流に選択マーカー遺伝子（選択薬剤耐性遺伝子およびEGFP）を組み込んだプラスミドに関して、大阪市立大学・医学部の研究支援プラットフォーム・動物実験施設におけるCRISPR-Cas9法を用いるトランスジェニック・マウス（TGマウス）作製法のために、マウスにおいて明白な有害作用を生じず定常遺伝子発現が可能なトランス遺伝子挿入部位、すなわちセーフ・ハーバー部位であるRosa26座位に血管内皮細胞特異的マウスVE-Cadherin 遺伝子の発現制御領域（mVEC）+選択マーカー遺伝子（選択薬剤耐性遺伝子およびEGFP）をノックインするためのコンストラクトを再構築する必要があり、その途中段階である。

In this study, we compared the biological characteristics of vascular endothelial cells (VECs) in tumors with those of normal VECs in cancer-specific microenvironments, and found that VECs were resistant to EGFP. High purity tumor vascular endothelial cells isolated, cultured, and biologically active inhibition effects of low molecular weight compounds on tumor vascular endothelial cells with high efficiency. Side effects, high specificity, and new rules for angiogenesis prevention therapy During the year, the vascular endothelial cell-specific gene expression was detected by the VE-Cadherin gene expression control field (mVEC) and the downstream gene expression control field (mVEC). CRISPR-Cas9 method for animal health facilities (CRISPR-Cas9 method) It is possible to detect the presence of a regular gene at the site of entry of the gene, at the site of entry of the gene, at Rosa26 locus, at the site of vascular endothelial cell-specific control of the development of VE-Cadherin gene (mVEC)+ at the site of selection of the gene (at the site of selection of the gene resistant to EGFP).

项目成果

Verification of the effects of calcium channel blockers on the immune microenvironment of breast cancer.

验证钙通道阻滞剂对乳腺癌免疫微环境的影响。

• DOI: 10.1186/s12885-019-5828-5
• 发表时间: 2019
• 期刊: BMC Cancer
• 影响因子: 3.8
• 作者: Takada K;Kashiwagi S;Asano Y;Goto W;Takahashi K;Fujita H;Takashima T;Tomita S;Hirakawa K;Ohira M.
• 通讯作者: Ohira M.