アクチン調節タンパク質ゲルソリンの機能抑制変異体によるアポトーシス誘導の分子機構解明

阐明肌动蛋白调节蛋白凝溶胶蛋白功能性抑制突变体诱导细胞凋亡的分子机制

• 批准号: 11770054
• 负责人: 藤田 寿一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770054/
• 关键词: ゲルソリン; 機能抑制変異体; GFP融合タンパク質; アポトーシス; アデノウイルス; ゲ゛ルゾリン; アボトーシス

アクチン調節タンパク質ゲルソリンは、重合核形成によるアクチン線維伸長の促進(Nucleating)、アクチン線維の切断(Severing)およびその末端の保護(Capping)という3つのアクチン重合調節機能を持ち、これらの両面性の機能を通じて重合-脱重合という両局面を制御し、細胞運動において重要な役割を担っている。ゲルソリンは、1次構造上、類似性のある6つの機能ドメイン(G1-G6)からなるが、我々はアクチン線維の切断(Severing)活性に必須であるG1ドメインを欠失したG2-6変異体は、Severing活性をin vitroで抑制し、さらに、発光オワンクラゲ由来の蛍光タンパク質GFP(Green Fluorescence Protein)との融合タンパク質として、Cos7細胞で一過性に発現したところ、接着性細胞のアポトーシスに特有な形態変化を引き起こし、細胞死が起こることを見い出した。本研究では、アクチン調節タンパク質ゲルソリンの機能抑制変異体によるアポトーシス誘導の分子機構解明することを目的とする。平成12年度は、昨年度に得た、G2-6機能抑制変異体を含む様々なゲルソリン欠失変異体のアデノウイルス・ベクター用いて、1)これまでに知られている、p53により発現誘導される細胞死誘導タンパク質Baxのプロモーターを有するルシフェラーゼ・プラスミドをレポーターとして、G2-6変異体を含む様々なゲルソリン欠失変異体によりBaxプロモーターが活性化されるかどうが、2)細胞死を抑制するBcl-2を共発現することで、G2-6変異体による細胞死が回避されるかどうかを検討した。その結果、1)G2-6変異体を含む様々なゲルソリン欠失変異体によりBaxプロモーターは活性化されず、ゲルソリン欠失変異体による細胞死においてp53を介する情報伝達経路は関与しないことが示唆された。2)細胞死抑制タンパク質Bcl-2の共発現によってもG2-6変異体による細胞死が回避されなかった。したがって、Bcl-2が関与する細胞死の情報伝達経路もG2-6変異体によるアポトーシス誘導に関与しないことが示唆された。

3. The regulation function of coincidence is to maintain the function of coincidence regulation, to control the situation of coincidence-declination, to control the situation of cell movement, and to control the important service of cell movement. The first order structure, similarity, and function of the first order structure (G1-G6)(Severing) activity must be determined by G1, G2-6, G2-6, G3 - 6, G4 - 6, G5 - 6, G6 - 6, G6 - 6, G7 - 6, G7 - 6, G8 - 6, G8 - 6, G8-(Green Fluorescence Protein) and fusion protein, Cos7 cells, transient appearance, adhesion, cell death, unique morphological changes, initiation, initiation, initiation. The aim of this study is to elucidate the molecular mechanisms involved in the functional inhibition of protein expression by protein regulation. In 2012, the G2-6 function inhibition variant was obtained in the previous year, and the G2-6 function inhibition variant was obtained in the previous year. 1) The G2- 6 function inhibition variant was obtained in the previous year. 1) The G2 - 6 function inhibition variant was obtained in the previous year. 2) The G2 - 6 function inhibition variant was obtained in the previous year. 1) The G2 - 6 function inhibition variant was obtained in the previous year. G2-6 heterogeneic protein contains a protein that is not activated by Bax, 2) inhibition of Bcl-2 co-expression by G2 - 6 heterogeneic protein, and 3) avoidance of Bcl-2 co-expression by G2-6 heterogeneic protein. The results are as follows: 1)G2-6 variant contains the following information: Bax, p53, p54, p56, p57, p58, p59, p59, p 2)Cell death inhibition protein Bcl-2 co-expression in G2-6 allogeneic cells The expression of Bcl-2 is related to cell death. The expression of Bcl-2 is related to cell death. The expression of Bcl-2 is related to cell death.

项目成果

H.Fujita, F.Okada, J.Hamada, et al.: "Gelsolin functions as a metastasis suppressor in B16-BL6 mouse melanoma cells and reqiurement of the carboxylterminus for its effect"International Journal of Cancer. in press. (2001)

H.Fujita、F.Okada、J.Hamada 等人：“凝溶胶蛋白在 B16-BL6 小鼠黑色素瘤细胞中起到转移抑制因子的作用，并且需要羧基末端发挥其作用”国际癌症杂志。

H.Kusano, S.Shimizu, R.C.Koya, H.Fujita, et al.: "Human gelsolin prevents apoptosis by inhibiting apoptotic mitochondorial changes via closing VDAC."Oncogene. 19. 4807-4814 (2000)

H.Kusano、S.Shimizu、R.C.Koya、H.Fujita 等人：“人凝溶胶蛋白通过关闭 VDAC 抑制细胞凋亡线粒体变化来防止细胞凋亡。”癌基因。

R.C.Koya, H.Fujita, S.Shimizu, M.Ohtsu, et al.: "Gelsolin inhibits apoptosis by blocking mitochondrial membrane potential loss and cytochrome c release."Journal of Biological Chemistry. 275. 15343-15349 (2000)

R.C.Koya、H.Fujita、S.Shimizu、M.Ohtsu 等人：“凝溶胶蛋白通过阻断线粒体膜电位损失和细胞色素 c 释放来抑制细胞凋亡。”生物化学杂志。

M.Takeuchi, T.Shichinohe, N.Senmaru, M.Miyamoto, H.Fujita, et al.: "The dominant negative H-ras mutant, N116Y, suppresses growth of metastatic human pancreatic cancer cells in the liver of nude mice."Gene Therapy. 7. 518-526 (2000)

M.Takeuchi、T.Shichinohe、N.Senmaru、M.Miyamoto、H.Fujita 等人：“显性失活 H-ras 突变体 N116Y 可抑制裸鼠肝脏中转移性人胰腺癌细胞的生长。

Y.Banno, H.Fujita, Y.Ono, et al.: "Differential phospholipase D activation by bradykinin and sphingosine 1-phosphate in NIH 3T3 fibroblasts overexpressing gelsolin"Journal of Biological Chemistry. 274. 27385-27391 (1999)

Y.Banno、H.Fujita、Y.Ono 等人：“在过度表达凝溶胶蛋白的 NIH 3T3 成纤维细胞中，缓激肽和 1-磷酸鞘氨醇对磷脂酶 D 的不同激活”《生物化学杂志》。