Lokalisierung und Funktion der Chemotaxis- und Motorkomponenten von Sinorhizobium meliloti: Eine in vivo Untersuchung unter Einsatz der FRET-Technik

苜蓿中华根瘤菌趋化性和运动成分的定位和功能：使用 FRET 技术的体内研究

• 批准号: 39093154
• 负责人: Professorin Dr. Birgit Scharf
• 金额: --
• 依托单位: Department of Molecular and Cellular Biology
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/39093154?language=en
• 关键词: Lokalisierung; und; Funktion; der; Chemotaxis

Die sensorische Signalkette zum Flagellenmotor in der Chemotaxis von Sinorhizobium meliloti unterscheidet sich vom gut untersuchten enterobakteriellen System in mindestens drei Punkten - Chemorezeption, Responsregulation und Motorfunktion. Den Schwerpunkt dieses Antrags bildet die Funktionsanalyse neuartiger Rezeptor-, Chemotaxis- und Motorkomponenten in vivo unter Einsatz der Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET)-Technik. Ein häufig verwendetes und etabliertes Fluorophorenpaar sind CFP und YFP, die mit den zu untersuchenden Proteinen fusioniert werden. Die FRET-Technik erlaubt eine zeitliche und räumliche Quantifizierung der interaktiven Dynamik von Proteinen in vivo. Chemorezeption: S. meliloti besitzt sieben membran-durchspannende und zwei lösliche Rezeptoren zur Wahrnehmung ihrer Umgebung und ihres metabolischen Zustandes. Chemorezeptoren bilden zur Signalamplifizierung ein dichtes Cluster am Zellpol aus. Die Wechselwirkung heterologer Rezeptoren in diesem Komplex soll nach Stimulierung mit unterschiedlichen Lockstoffen untersucht werden. Ein besonderes Augenmerk wird auf die Lokalisierung und Funktion der löslichen Rezeptoren gelegt. Ihre genetisch belegte wichtige Rolle bei der Chemokinesis (Erhöhung der Schwimmgeschwindigkeit als Bewegungsmodulator) soll mit einer Mutante ohne membran-durchspannende Rezeptoren gezielt untersucht werden. Responsregulation: Das rhizobielle Chemotaxissystem verfügt über zwei Responsregulatoren, CheY1 und CheY2. Aktives CheY2~P ist der dominante Regulator der Motorrotation, während CheY1 als Phosphatabfluss dient. Die Dephosphorylierung des akivierten Responsregulators (CheY2~P) verläuft über eine Retrophosphorylierungskaskade zurück auf CheA, welches dann wiederum freies CheY1 phosphoryliert. Ein weiteres neues Protein, CheX, ist an diesem Regulationskreis beteiligt. Die Wechselwirkung der vier Proteine miteinander soll qualitativ und quantitativ untersucht werden. Nach chemischer Stimulierung ist eine dynamische Änderung der Affinitäten von CheY1 und CheY2 zu CheA zu erwarten. Außerdem soll die postulierte Bindung von CheY2~P an den Flagellenmotor nachgewiesen werden. Flagellenmotor: Der S. meliloti-Flagellenmotor rotiert ausschließlich im Uhrzeigersinn, kann aber die Rotationsgeschwindigkeit modulieren. Zwei neuartige periplasmatische Motilitätsproteine, MotC und sein Chaperon, MotE, sind essentiell für die Rotation. Zu ihrer weiteren Charakterisierung soll die FRET-Methode erstmalig auf periplasmatische Proteine angewendet werden. Ihren Einsatz finden hier spezielle mRFP1-Mutantenproteine, deren korreke Faltung und Fluoreszenz im Periplasma gesichert ist. Damit könnten Lokalisierung und Dynamik von MotC am Motor mit und ohne Stimulus analysiert werden. Folgende Modellvorstellung zur Funktion von MotC leiten diese Experimente: MotC stabilisiert und rekrutiert die Statorkomponente MotB und sichert so die schnelle Rotation des Motors.

紫花苜蓿中华根瘤菌在肠道中的感觉--化学感受、反应调节和运动功能。在荧光共振能量转移(FRET)技术下，分析体内的中性受体、化学趋化和运动成分。这是一种新型的绿色环保产品，也是一种新型的绿色食品。在活体内相互作用的动力学和蛋白质的相互作用。化学方法：甜菜夜蛾的新陈代谢和新陈代谢的代谢率为L。在ZellpolAus的丛林中，我们可以找到更多的东西。我们的异构体Rezeptoren in Diesem Komplex soll nach Stimulierung MIT unterschiedlichen Lockstoffen untersusuden.我们将为您服务，并为您服务，为您服务。这是一种发生在化学运动(Schwimmgeschwindigkeit和Bewegangsmodator)中的一种新的方法。反应调节：Das根瘤菌趋化系统VerfügTüber zwei反应调节，CheY1和CheY2。Akties CheY2~P是发动机旋转中的主要调节器，Während CheY1 ALS Phocatabuss。除磷响应调节剂(CheY2~P)verläUftüber eine Retrop ylierungskaskade zurück auf Chea，Welches Dann wiederum freies Cheyliert(CheY2~P)verläuftüber eine rerorophylierungskaskade zurück auf Chea，Welches Dann wiederum freies CheyyliertEin weites Neues Protein，Chex，是一种介于两者之间的调节蛋白。我们对其进行了定性和定量研究。每一个化学家都会给你一种动力，一种是一种亲和力，另一种是一种力量。在此基础上，提出了一种新的解决方案，并对其进行了改进。FLAGELLEN MOTOR：DER S.Meliloti-FLAGELLEN MOTITOR ROTERERT OUSCHILEN？LICH IM Uhrzeigersinn，kaner die Rotationsgeschwindigkeit modieren.Zwei Neuartige周塑蛋白、MotC和Sein Chaperon、Mote、Sind Essentiell für模具旋转。在此基础上，提出了一种新的周质蛋白检测方法。我发现了更高规格的mRFP1-Mutanteine，Deren korreke Faltung and Fluoreszenz im Peridium gesichert ist.他妈的汽车和汽车的动力，以及对刺激的分析。在此基础上，我们进行了以下几个方面的实验：电机的稳定性和可靠性，以及电机的转动速度。