新規心臓線維芽細胞サブセットの機能解析と心筋梗塞後心不全の新たな治療戦略の開発

新型心脏成纤维细胞亚群的功能分析及心肌梗死后心力衰竭新治疗策略的开发

• 批准号: 22KJ2695
• 负责人: 高 聖淵
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2695/
• 关键词: 心筋梗塞; 炎症; 線維芽細胞

心臓線維芽細胞におけるSipa1の発現が心筋梗塞後の急性期における炎症を制御していることが示されており、その制御機構を解明する目的でSipa1 flox/flox Tcf21Cre/+ tdTomatoレポータマウスを作成し、心筋梗塞を作成してフローサイトメトリーにて単離したSipa1がノックアウトされた線維芽細胞と単球、マクロファージを単離し、それぞれ梗塞後1日目から3日目までの遺伝子発現をそれぞれ解析した。その結果、梗塞後1日目より線維芽細胞においてCcl2, Ccl7の発現がSipa1ノックアウトされた線維芽細胞において低下している事に加えて、浸潤した単球をマクロファージに分化させ炎症を賦活化する因子として知られるGene Xの発現も低下していることを見出した。そして、浸潤した単球やマクロファージの炎症性サイトカイン、ケモカインの発現は梗塞後1日目ではノックアウト群と対照群では差が無いのに対し、心筋梗塞後3日目に於いては有意にノックアウト群では発現が抑制されていたことを見出した。次に心臓線維芽細胞におけるSipa1がどうCcl2, Ccl7, Gene Xの発現を制御しているかを調べるため、マウスの心臓から線維芽細胞の初代培養を行い、レンチウイルスを用いてSipa1の発現をノックダウンしてRNA sequenceによる遺伝子発現の差異を検討した。その結果、Sipa1が負に制御しているRap1シグナル系の下流遺伝子の発現に変化がない一方で、新たに別系統のシグナル分子であるGene Yの発現に差があることを見出した。そのGene Yが制御するシグナル分子の活性化の度合いをウエスタンブロットで検討したところ、ノックダウン群でシグナル分子の活性が抑制されており、Ccl2, Ccl7, Gene Xの発現抑制の原因になっていることが判明した。

The development of Sipa1 cells in the acute phase after myocardial infarction, the control of inflammation, the control of inflammation, the development of Sipa1 flox/flox Tcf21Cre/+ tdTomato complex, the development of myocardial infarction, the development of myocardial infarction, the development of myocardial infarction, The first day after the infarction, the third day after the infarction, the second day after the infarction, the third day after the infarction, the third day after the infarction. As a result, the expression of Ccl2, Ccl7 in the cells of the line-derived cells decreased 1 day after infarction, and the expression of the inflammatory factors in the cells of the line-derived cells increased and infiltrated 1 day after infarction. Inflammatory tissue, inflammation, and infiltration were observed 1 day after infarction and 3 days after myocardial infarction. In addition, the expression of Sipa1, Ccl2, Ccl7, Gene X was regulated during the primary culture of Sipa1 and Ccl2, Ccl7, Gene X. The differences in expression of gene X in Sipa1, Ccl2, Ccl7 and Ccl7 were discussed. As a result, Sipa1 was negatively controlled by Rap1, and the difference in the occurrence of Gene Y in a new system was revealed. To identify the reasons for inhibition of Gene X expression, Ccl2, Ccl7, and Ccl2 expression, the extent of inhibition of gene Y expression and the degree of inhibition of Gene X expression was investigated.