Functional analysis of novel BMP antagonist as causal factor of kidney disease progression in diabetes

新型 BMP 拮抗剂作为糖尿病肾病进展致病因素的功能分析

• 批准号: 21K16173
• 负责人: 小林 洋輝
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16173/
• 关键词: NBL1; BMP-7; EMT; 糖尿病性腎症; NBL１; 腎線維化; BMP antagonist; 慢性腎臓病; オミクス

研究代表者はBone Morphogenetic Protein(BMP)-7のantagonistであるNeuroblastoma suppressor of tumorigenicity 1(NBL1)が将来の末期腎不全(ESRD) を強力に予測するバイオマーカーであることを明らかにした。またNBL1KOマウスが、UUOにより誘導した腎線維化に対して抵抗性があることがわかったが、腎線維化に関与する分子機序や、糖尿病性腎症でのNBL1の役割は未知であるため、これらを明らかとすることを目的とした。1) ヒト近位尿細管細胞であるHK-2細胞に、NBL1のsiRNAをトランスフェクションし、DMEM無血清培地でserum starvaitonを24時間行った後、TGFβ1 (5ng/ml)を培地に添加し４８時間刺激した。これらの細胞から蛋白を回収し、western blotを行った結果、negative control siRNAでは、TGFβ1の刺激によって、EMTのマーカーであるE-cadherinの発現がDMEM培地と比べて減少したが、NBL1 siRNAをトランスフェクションした細胞では、E-cadherinの減少が抑制された。またαSMAの発現は、negative control siRNAでは、その発現が上昇したが、NBL1 siRNAでは、コントロールsiRNAと比べると発現が低下していた。現在は、SMAD1/5、SMAD2/3のリン酸化への影響を検討中である。2) NBL1 KOマウス(ホモタイプ、ワイルドタイプ)を、麻酔下で右腎摘出を行った後に高脂肪餌を与え、ストレプトゾトシンを投与して糖尿病マウスを作成した。糖尿病発症確認後24週まで飼育後に麻酔下で心臓より全採血を行い、臓器を採取した。現在、組織でのmRNA、タンパクの発現解析や、組織染色を行なっている。

The study representative wrote that Bone Morphogenetic Protein(BMP)-7 "antagonist" Neuroblastoma suppressor of tumorigenicity 1(NBL1)"is a powerful predictor of future end-stage renal insufficiency (ESRD). NBL1KO is not known, UUO is not known, and the molecular mechanism of NBL1 KO is unknown. 1)HK-2 cells, NBL1 siRNA, serum starvaiton, DMEM serum-free culture were cultured for 24 hours and TGFβ1 (5ng/ml) was added for 48 hours. Western blot analysis showed that the expression of E-cadherin was inhibited by NBL1 siRNA. The expression of αSMA and NBL1 siRNA increased, while the expression of NBL1 siRNA decreased. Now, SMAD1/5 and SMAD2/3 are under investigation. 2)NBL1 KO 24 weeks after diagnosis of diabetes mellitus, blood samples were collected from the heart and the organs were taken. Now, tissue mRNA, protein expression analysis, tissue staining, etc.