T細胞ー上皮細胞間HIV感染が成立する上皮細胞の探索とそのメカニズム・意義の解析

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ウイルス感染症において、体内の感染部位をつぶさに明らかにすることは病態解析のための最優先課題であり、特に持続感染可能なウイルスの場合、感染部位の全解明が体内からのウイルス排除に向けた第一歩となる。HIV感染の中心がCD4分子発現免疫細胞であることは明白だが、体内の意外な箇所でのCD4非依存的感染も存在する。感染T細胞からの腎上皮細胞や精細胞への感染はHIV関連腎症や感染経路の研究過程で自然と発見されたが、最新の知見では気管支上皮細胞へのHIV感染・ウイルス産生も確認されている。本研究の目的は、T細胞－上皮細胞間HIV感染が成立する上皮細胞の網羅的探索とそのメカニズムおよび意義の解析である。本年度は、T細胞株と腎上皮細胞株を用いて、HIV感染T細胞から上皮細胞へのHIV感染成立を判定する系を樹立した。T細胞株に、GFPを発現し複製可能なHIVのレポータ―ウイルスを感染させた後、上皮細胞株と共培養を行った。T細胞株と上皮細胞株の区別のために蛍光色素で標識された抗CD3抗体を用いて細胞表面を染色した。フローサイトメーターを用いて、AreaとHeightでドットプロットを展開してダブレット・トリプレットを除去した。さらに細胞の大きさ・形・CD3発現レベルでT細胞株と上皮細胞株を区別した。そこでT細胞株がGFPを発現していることに加え、共培養した上皮細胞についてもGFPを発現しているものがあることが認められた。上皮細胞のみに直接ウイルスを加えた場合には、GFP陽性となる細胞は認められなかった。