難治性TP53変異白血病の治療抵抗性獲得機序の解明と新規治療標的の探索

成人急性骨髄性白血病 (AML)は、近年の新規分子標的治療薬の登場以降も、未だ治療成績が不良であり、新規治療法の開発が喫緊の課題である。特に、癌抑制遺伝子TP53の変異は、既存の治療薬に対する治療抵抗性を示す最も強力な予後不良因子であるが、その治療抵抗性を克服する治療法は未だ確立されていない。申請者らは、TP53変異AMLが治療薬存在下で生存するために依存する経路が存在し、臨床的な治療抵抗性に関与していると考えた。本研究では、将来の薬剤開発を念頭に、複雑な細胞状態の変化をきたすTP53変異AMLが依存している経路を網羅的機能的手法により解明し、実臨床の難治性病態に関連する標的を同定することを目的とする。2022年度に申請者は、 CRISPR-Cas9システムによる全ゲノムスクリーニングの実験系を確立、実行した。Cas9を強制発現したマウスTP53野生型AML細胞を作成し、isogenicなTP53変異型AML細胞を樹立した。これらの細胞株に対し本研究では、GeCKOおよびBrie の2種類の全ゲノムsgRNAライブラリを用いた。 Cas9AML細胞にsgRNAライブララリを感染させ、約14日培養後に、各sgRNAの全sgRNAリード数に占める割合の変化をMAGeCKプログラムで解析した。その結果、2種類のsgRNAライブラリで共通してTrp53変異白血病でより細胞増殖に必要である遺伝子を抽出した。これらの遺伝子についてpathway解析を行ったところ、cell cycle phase transitionやRNA splicingに関連する遺伝子群が有意に抽出された。 現在、これらの機能的にTrp53変異白血病の腫瘍抑制に働くと考えられる候補遺伝子について、ヒト白血病患者の遺伝子変異、発現解析データを用いて治療標的となりうる遺伝子を絞り込み、機能解析を行っている。

成人急性骨髄性白血病 (AML)は、近年の新規分子標的治療薬の登場以降も、未だ治療成績が不良であり、新規治療法の開発が喫緊の課題である。特に、癌抑制遺伝子TP53の変異は、既存の治療薬に対する治療抵抗性を示す最も強力な予後不良因子であるが、その治療抵抗性を克服する治療法は未だ確立されていない。申請者らは、TP53変異AMLが治療薬存在下で生存するために依存する経路が存在し、臨床的な治療抵抗性に関与していると考えた。本研究では、将来の薬剤開発を念頭に、複雑な細胞状態の変化をきたすTP53変異AMLが依存している経路を網羅的機能的手法により解明し、実臨床の難治性病態に関連する標的を同定することを目的とする。2022年度に申請者は、 CRISPR-Cas9システムによる全ゲノムスクリーニングの実験系を確立、実行した。Cas9を強制発現したマウスTP53野生型AML細胞を作成し、isogenicなTP53変異型AML細胞を樹立した。これらの細胞株に対し本研究では、GeCKOおよびBrie の2種類の全ゲノムsgRNAライブラリを用いた。 Cas9AML細胞にsgRNAライブララリを感染させ、約14日培養後に、各sgRNAの全sgRNAリード数に占める割合の変化をMAGeCKプログラムで解析した。その結果、2種類のsgRNAライブラリで共通してTrp53変異白血病でより細胞増殖に必要である遺伝子を抽出した。これらの遺伝子についてpathway解析を行ったところ、cell cycle phase transitionやRNA splicingに関連する遺伝子群が有意に抽出された。 現在、これらの機能的にTrp53変異白血病の腫瘍抑制に働くと考えられる候補遺伝子について、ヒト白血病患者の遺伝子変異、発現解析データを用いて治療標的となりうる遺伝子を絞り込み、機能解析を行っている。