ショウジョウバエの新規細胞周期因子の解析

MAPKKとの遺伝的相互作用を示し、染色体の分配異常表現型の突然変異Gp99を同定した。Gp99遺伝子が新規蛋白質をコードするため、MAPKシグナル伝達系及び細胞周期制御系における作用機構は不明であり、本研究では表現型解析、遺伝子産物の細胞内動態解析、相互作用因子の同定によって作用機構を解明することを目的にしている。1) 遺伝子導入による表現型回復実験:Gp99は転写開始点附近にトランスポゾンが挿入された遺伝子として同定されたが、すぐ上流に別の遺伝子が見つかり、多重突然変異である可能性が否定できずにいた。しかし、Gp99のみを含むゲノム断片を導入したところ表現型の完全回復が見られ、原因遺伝子である確証が得られると共に、剛毛矯小化などの表現型もGp99に依存していることが判った。2) 過剰発現実験: Gp99を成虫複眼で過剰発現させたところ、個眼配列に乱れが生じ、細胞分裂制御に影響したと期待され、複眼の正常な発生にはGp99の発現の正しい制御が必要だと判明した。今後は解析を組織レベルで進めると共にこの新規表現型を抑圧もしくは増強する突然変異を検索し、相互作用因子を同定する。3) 標識アミノ酸配列を付加した融合蛋白の発現によるGp99遺伝子産物のの解析:HA標識配列を付加したGp99遺伝子を導入し、GAL4/UAS系で発現させたところ、正しい分子量の蛋白質がショウジョウバエから特異的に検出された。標識蛋白質の細胞内局在や細胞周期を通じた動態に関してはまだ結論に到っておらず、免疫沈降実験による結合因子の検索と併せて解析を続ける予定である。

MAPKKとの遺伝的相互作用を示し、染色体の分配異常表現型の突然変異Gp99を同定した。Gp99遺伝子が新規蛋白質をコードするため、MAPKシグナル伝達系及び細胞周期制御系における作用機構は不明であり、本研究では表現型解析、遺伝子産物の細胞内動態解析、相互作用因子の同定によって作用機構を解明することを目的にしている。1) 遺伝子導入による表現型回復実験:Gp99は転写開始点附近にトランスポゾンが挿入された遺伝子として同定されたが、すぐ上流に別の遺伝子が見つかり、多重突然変異である可能性が否定できずにいた。しかし、Gp99のみを含むゲノム断片を導入したところ表現型の完全回復が見られ、原因遺伝子である確証が得られると共に、剛毛矯小化などの表現型もGp99に依存していることが判った。2) 過剰発現実験: Gp99を成虫複眼で過剰発現させたところ、個眼配列に乱れが生じ、細胞分裂制御に影響したと期待され、複眼の正常な発生にはGp99の発現の正しい制御が必要だと判明した。今後は解析を組織レベルで進めると共にこの新規表現型を抑圧もしくは増強する突然変異を検索し、相互作用因子を同定する。3) 標識アミノ酸配列を付加した融合蛋白の発現によるGp99遺伝子産物のの解析:HA標識配列を付加したGp99遺伝子を導入し、GAL4/UAS系で発現させたところ、正しい分子量の蛋白質がショウジョウバエから特異的に検出された。標識蛋白質の細胞内局在や細胞周期を通じた動態に関してはまだ結論に到っておらず、免疫沈降実験による結合因子の検索と併せて解析を続ける予定である。