クローン化により同定した焦点接着に局在するタンパク質、CBP-1、の機能の解明

阐明 CBP-1 的功能，CBP-1 是一种通过克隆鉴定的位于粘着斑中的蛋白质

• 批准号: 09780660
• 负责人: 青砥 宏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780660/
• 关键词: タンパク質チロシンキナーゼ; CAKβ; PYK2; Hic-5; チロシンリン酸化; SH2ドメイン; 核移行; FAK; パキシリン; 焦点接着

1.CAKβ/PYK2結合タンパク質として同定したCBP-1(Hic-5)のチロシンリン酸化は、COS-7細胞でCAKβの共発現により亢進し、そのレベルは細胞を高浸透圧で刺激すると増強した。Y60F変異Hic-5の発現では、Hic-5のチロシンリン酸化が認められなかったので、Hic-5Tyr-60残基がこのリン酸化の主要部位であることを見い出した。CAKβのHic-5結合部位欠失変異体は、Hic-5をチロシンリン酸化することが出来ず、リン酸化には両者の結合が重要であった。リン酸化したHiC-5はGST-CskSH2に結合したが、この結合は特異的で、Fyn、Src、CskのSH2ドメインには結合しなかった。2.CAKβの種々の1アミノ酸置換変異を作成し、これらを培養細胞で発現し、細胞に与える影響を検討した。野生型CAKβは細胞質に局在するにもかかわらず、A点変異を持つCAKβは核にのみ局在することが明らかになった。A点変異CAKβを発現する細胞では、核内におけるチロシンリン酸化が亢進しており、核内においてもCAKβがチロシンキナーゼとして機能していると推定される。CAKβはHic-5と複合体を形成することが知られているので、A点変異CAKβをHic-5と共発現させた時のCAKβとHic-5の細胞内局在性を検討した。Hic-5は通常、焦点接着に局在するタンパク質であるが、CAKβと共発現すると主に細胞質に存在するようになった。A点変異CAKβとの共発現では、細胞質のみならず核内にも存在するようになった。A点変異CAKβとHic-5とを共発現した細胞をLeptomycin B存在下で培養すると、核内に光学顕微鏡下でも観察可能なCAKβとHic-5を含む凝集体を形成した。CAKβの核における機能の解明は今後の課題である。

1.CAK β

项目成果

佐々木輝捷: "非受容体型蛋白質チロシンキナーゼCAKβ/PYK2" 蛋白質核酸酵素. 44・2. 112-122 (1999)

佐佐木照义：“非受体蛋白酪氨酸激酶CAKβ/PYK2”蛋白质核酸酶44・2（1999）。

Ishino,Masaho.: "Identification of an Efs isoform that lacks the SH3 domain and chromosomal mapping of human Efs." Oncogene. 15・14. 1741-1745 (1997)

Ishino, Masaho.：“缺乏 SH3 结构域的 Efs 亚型的鉴定和人类 Efs 的染色体定位。”15・14 (1997)。

Ohba,Takeaki.: "Interaction of two proline-rich sequences of cell adhesion kinase β with SH3 domains of p130^<Cas>-relatedproteins and a GTPase-activating protein,Graf." Biochemical J.330・3. 1243-1254 (1998)

Ohba，Takeaki.：“细胞粘附激酶 β 的两个富含脯氨酸的序列与 p130^<Cas> 相关蛋白和 GTP 酶激活蛋白的 SH3 结构域的相互作用，生物化学 J.330·3。” (1998)

Ohba, T.: "Dot far-western blot analysis of relative binding affinities of the Src homology 3 domains of Efs and its related proteins." Analytical Biochemistry. 262・2. 185-192 (1998)

Ohba, T.：“Efs 及其相关蛋白质的 Src 同源 3 结构域的相对结合亲和力的点远蛋白印迹分析。”分析生物化学 262·2（1998）。

Sasaki, H.et al.(分担): "Cell adhesion kinaseβ(CAK β)forms a complex with a new member, Hic-5, of proteins localized at focal adhesions. in“Cytoskeleton and G-proteins in the reglation of Cancer"edited by Noboru Kuzumaki." Hokkaido University Medical Librar

Sasaki, H. 等人（贡献者）：“细胞粘附激酶β (CAK β) 与位于细胞骨架和 G 蛋白调节癌症的粘着斑的新成员 Hic-5 形成复合物。 “北海道大学医学图书馆编辑”