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FAK族キナーゼCAKβと焦点接着局在Hic-5による細胞形態とJNKの調節機構

FAK 家族激酶 CAKβ 和局部粘附斑 Hic-5 对细胞形态和 JNK 的调节

基本信息

批准号：
10152251
负责人：
佐々木輝捷
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152251/
关键词：
タンパク質チロシンキナーゼ核移行焦点接着 CAKβ PYK2 Hic-5 SH2ドメイン GFP

项目摘要

1. CAKβ/PYK2は細胞質に細胞骨格に添って分布するが、A点変異CAKβは核にのみ局在し、核内タンパク質のチロシンリン酸化を促進した。COS細胞やCaco2細胞に野生型CAKβを発現すると、細胞の凝集が起こった。A点変異CAKβの発現では、発現量に差が無いにもかかわらず、細胞の凝集が起こらなかった。COS7細胞にGFP-CAKβを発現すると、発現タンパク質は細胞質に局在した。この細胞をLeptomycin Bの存在下に培養すると、GFP-CAKβは核に蓄積した。Hic-5は通常、焦点接着に局在するが、CAKβを共発現すると細胞質に存在するようになった。A点変異CAKβとの共発現では、一部のHic-5が核に見い出された。今後の研究により、CAKβの核における機能を明らかにしたい。2.Hic-5はそのTyr-60がCAKβによりチロシンリン酸化され、この部位にCskSH2ドメインが特異的に結合した。3.CAKβに結合するタンパク質を、酵母two-hybrid系を用いてクローン化した。4.補助金により購入した落射式蛍光読取装置は、CAKβおよびHic-5の変異体cDNAや発現vectorを調製する際に核酸の電気泳動分離像を記録する目的に、また、これらのタンパク質を電気泳動で分離した後、そのWestern-blot像を記録・保存する目的に使用した。

1. CAKβ/PYK2 is a cytosolic protein that is distributed in the cytoplasm of the cell. A point of differentiation of CAKβ in the nucleus promotes the acidification of the cytoplasm. COS cells and Caco-2 cells showed wild-type CAKβ expression and aggregation. A point is different CAKβ discovery, discovery amount difference, cell aggregation start. COS7 cells GFP-CAKβ expression, expression and cytoplasmic structure These cells were cultured in the presence of Leptomycin B and GFP-CAKβ accumulated in the nucleus. Hic-5 is usually present in the cytoplasm where CAKβ is co-expressed. A point is different from CAKβ, and a part of Hic-5 nucleus appears in the middle. Future research on CAKβ nuclear function will be carried out in the future. 2. Tyr-60 of Hic-5 was found to bind specifically to CAKβ and CskSH2. 3. CAK β binding protein, yeast two-hybrid system 4. The electron capture device is used for recording and preserving the electrokinetic separation image of nucleic acid when modulating the variant cDNA of CAKβ and Hic-5.