新たにクローン化したCAKβおよびEfsの細胞接着、分化増殖、癌化における役割

新克隆的 CAKβ 和 Efs 在细胞粘附、分化和增殖以及癌发生中的作用

• 批准号: 08265252
• 负责人: 佐々木 輝捷
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265252/
• 关键词: タンパク質チロシンキナーゼ; SH3ドメイン; CAKβ; Efs; 細胞内局在性; 焦点接着; アデノウイルスベクター; 単クローン抗体

私達は、FAK分子族に属する第2のタンパク質チロシンキナーゼCAKβをクローン化により同定し、また、FynのSH3ドメインに結合するp130Casに似たdockingタンパク質Efsをクローン化により同定し研究している。今年度の研究により、次の事が明らかになった。1.ラット臓器・組織におけるCAKβの発現を免疫組織学化学とin situ hybridizationにより検討した所、CAKβが微絨毛、繊毛、軸索に多く発現していた。2.種々の培養細胞株を用いて、CAKβの細胞内局在性を免疫細胞化学により検討した所、CAKβは上皮系細胞の細胞相互接続部位の表面膜に沿って存在する他、微小管およびミクロフィラメントと弱く結合して細胞質に多く存在した。3.CAKβに結合するタンパク質のcDNAを発現ライブラリーのscreeningにより検索し、CAKβC末端ドメインに結合するタンパク質CBP-1を同定した。CBP-1は焦点接着に局在する新規のタンパク質であり、そのNドメインでCAKβに結合する。CBP-1を免疫沈降するとCAKβが共沈した。CAKβのC末端ドメインに対する単クローン抗体で免疫染色することにより、CAKβの一部が焦点接着に存在することを明らかにした。4.Efs cDNAを用いてヒト脳海馬cDNA libaryをscreeningした結果、SH3ドメインの無いEfs isoformのcDNAが得られた。ヒト胎盤と肺組織を用いて、SH3ドメインを有するEfsとSH3の無いEfsの存在を、Efs SH3ドメインに対する単クローン抗体を用いて証明した。現在、Efsの関与するシグナル路をアデノウイルスベクターに組み込んだEfs cDNAを用いて解析している。恒温浸とう培養機は、CAKβおよびEfsのGST融合タンパク質を調製する際に、大腸菌を培養する目的に使用した。

Private は, the family of the FAK (molecular に す る 2 の タ ン パ ク qualitative チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ CAK beta を ク ロ ー ン change に よ り with し, ま た, Fyn の SH3 ド メ イ ン に combining す る p130Cas に like た docking タ ン パ ク qualitative Efs を ク ロ ー ン change に よ り with the setting し し て い る. This year, <s:1> research によ によ and the next event が will be ら になった になった. 1. ラ ッ ト viscera, organization に お け る CAK beta の 発 を immune histological chemistry と now in situ hybridization に よ り beg し 検 た, CAK beta が microvilli, 繊 MAO, axonal に く 発 now し て い た. 2. Kind of 々 の culture cell lines を with い て, CAK の beta cells in the sexual を immunocytochemistry に よ り beg し 検 た の, CAK beta は epithelial cells by each other after の 続 parts surface film に along っ て exist す る he, tiny tubes お よ び ミ ク ロ フ ィ ラ メ ン ト と weak く combining し て cytoplasm に し more く た. 3. CAK beta に combining す る タ ン パ ク qualitative の cDNA を 発 now ラ イ ブ ラ リ ー の screening に よ り 検 suo し, CAK beta C terminal ド メ イ ン に combining す る タ ン パ を ク quality CBP - 1 set with し た. CBP 1 は focus then に bureau in す る new rules の タ ン パ ク qualitative で あ り, そ の N ド メ イ ン で CAK beta に combining す る. Cpp-1 を immune deposition するとCAKβが co-deposition た. CAK beta の C terminal ド メ イ ン に す seaborne る 単 ク ロ ー ン antibody で す immune dyeing る こ と に よ り, CAK beta の a が focus then に exist す る こ と を Ming ら か に し た. 4.Efs cDNAを results of <s:1> てヒト脳 hippocampal cDNA libaryをscreening <s:1> た results, SH3ドメ <s:1> <s:1> <s:1> no が of <s:1> Efs isoform が cDNAが obtained られた. ヒ ト placenta と を lung tissue with い て, SH3 ド メ イ ン を have す る Efs と SH3 の no い Efs の を, Efs SH3 ド メ イ ン に す seaborne る 単 ク ロ ー を ン antibody with い て prove し た. Now, the Efs の masato and す る シ グ ナ ル road を ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー に group み 込 ん だ Efs cDNA を with い て parsing し て い る. Constant temperature immersion と う training machine は, CAK beta お よ び Efs の GST fusion タ ン パ ク qualitative を modulation す る interstate に, coliform を cultivate す る purpose に use し た.

项目成果

Sciliano,J.C.: "Differential regulation of PYK2/CAKβ and pp125-FAK by glutamate and depolarization in rat hippocampus." J.Biol.Chem.271・46. 28942-28946 (1996)

Sciliano, J.C.：“大鼠海马中谷氨酸和去极化对 PYK2/CAKβ 和 pp125-FAK 的差异调节。”J.Biol.Chem.271·46 (1996)。

Ishino.M.: "Molecular cloning of a cDNA encoding a phosphoprotein,Efs,which contains a Src homology 3 domain and associates with Fyn." Oncogene. 11・11. 2331-2338 (1995)

Ishino.M.：“编码磷蛋白 Efs 的分子克隆，其包含 Src 同源 3 结构域并与 Oncogene 11・11 2331-2338 (1995)”。

Inazawa,J.: "Precise localization of the human gene encoding cell-adhesion kinase β (CAKβ/PYK2)to chromosome 8 at p21.1 by fluorescence in situ hybridization." Hum.Genet.98・4. 508-510 (1996)

Inazawa, J.：“通过荧光原位杂交将编码细胞粘附激酶 β (CAKβ/PYK2) 的人类基因精确定位到 8 号染色体上的 p21.1。”Hum.Genet.98·4 (1996) ）

Mitaka,T.: "Restricted expression of cell adhesion kinase-β in rat tissues." Amer.J.Pathol.150・1. 267-281 (1997)

Mitaka, T.：“大鼠组织中细胞粘附激酶-β 的限制性表达。”Amer.J.Pathol.150·1（1997）。

Ishino,M.: "Identification of an Efs isoform that lacks the SH3 domain and chromosomal mapping of human Efs." Oncogene. (in press). (1997)

Ishino,M.：“缺乏 SH3 结构域的 Efs 亚型的鉴定以及人类 Efs 的染色体定位。”