新たにクローン化した第2のFAK、CAKβ、の活性化機序とシグナル伝達機構の研究

新克隆的第二个FAK CAKβ的激活和信号转导机制研究

• 批准号: 08670155
• 负责人: 佐々木 輝捷
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670155/
• 关键词: タンパク質チロシンキナーゼ; CAKβ; 免疫組織化学; in situ hybridization; 細胞内局在性; CBP-1; 焦点接着; チロシンリン酸化

私達は、FAK分子族に属する第2のタンパク質チロシンキナーゼCAKβをクローン化により同定し研究している。今年度の研究により、次の事が明らかになった。1,ラット臓器・組織におけるCAKβの発現を免疫組織化学とin situ hybridizationにより検討した所、CAKβが微絨毛、繊毛、軸索に多く発現していた。2,種々の培養細胞株を用いて、CAKβの細胞内局在性を免疫細胞化学により検討した所、CAKβは上皮系細胞の細胞相互接触部位の表面膜に沿って存在する他、微小管およびミクロフィラメントと弱く結合して細胞質に多く存在した。3,CAKβに結合するタンパク質のcDNAを発現ライブラリーのscreeningにより検索し、CAKβ末端ドメインに結合するタンパク質CBP-1を同定した。CBP-1は焦点接着に局在する新規のタンパク質であり、そのNドメインでCAKβに結合する。CBP-1を免疫沈降するとCAKβが共沈した。CAKβのC末端ドメインに対する単クローン抗体で免疫染色することにより、CAKβの一部が焦点接着に存在することを明らかにした。4,CBP-1はチロシン残基のリン酸化を受けるタンパク質であった。このチロシンリン酸化は、CAKβと同様に、リゾホスファチジン酸、エンドセリンなどによる細胞の刺激に伴い亢進し、また、細胞を高浸透圧にさらすと亢進した。CAKβがCBP-1をチロシンリン酸化する可能性を検討している。また現在、CAKβの関与するシグナル路をアデノウイルスベクターに組み込んだCAKβcDNAを用いて解析している。パーソナル超遠心機は、CAKβおよびCBP-1の免疫沈降実験で抗原抗体複合体を集める目的に頻用している。

The second part of FAK molecular family was studied in detail. This year's research is very important, and the next thing is very important. 1. The expression of CAKβ was detected by immunohistochemistry and in situ hybridization. The expression of CAKβ was detected by microvilli, hairs and axons. 2. The intracellular localization of CAKβ in cultured cell lines was investigated by immunocytochemistry. CAKβ existed along the surface membrane of epithelial cells in contact with each other. 3,CAKβ binding to the cDNA of the protein CBP-1 is the same as CAKβ terminal binding to the protein CBP-1. CBP-1 is a new focal point for CAKβ binding. CBP-1 is immune to CAKβ. CAKβ C-terminal antibodies are present in a number of areas. 4,CBP-1 is the most important amino acid residue in the protein. The cells were stimulated by CAK β, CAKβ, CA CAKβ-CBP-1 is a new type of protein. CAKβcDNA is used for analysis of CAKβcDNA. The antigen-antibody complex of CAKβ and CBP-1 is frequently used for the purpose of collection.

项目成果

Sciliano,J.C.: "Differential regulation of PYK2/CAKβ and pp125-FAK by glutamate and depolarization in rat hippocampus." J.Biol.Chem.271・46. 28942-28946 (1996)

Sciliano, J.C.：“大鼠海马中谷氨酸和去极化对 PYK2/CAKβ 和 pp125-FAK 的差异调节。”J.Biol.Chem.271·46 (1996)。

Ishino.M.: "Molecular cloning of a cDNA encoding a phosphoprotein,Efs,which contains a Src homology 3 domain and associates with Fyn." Oncogene. 11・11. 2331-2338 (1995)

Ishino.M.：“编码磷蛋白 Efs 的分子克隆，其包含 Src 同源 3 结构域并与 Oncogene 11・11 2331-2338 (1995)”。

Inazawa,J.: "Precise localization of the human gene encoding cell-adhesion kinase β (CAKβ/PYK2)to chromosome 8 at p21.1 by fluorescence in situ hybridization." Hum.Genet.98・4. 508-510 (1996)

Inazawa, J.：“通过荧光原位杂交将编码细胞粘附激酶 β (CAKβ/PYK2) 的人类基因精确定位到 8 号染色体上的 p21.1。”Hum.Genet.98·4 (1996) ）

Mitaka,T.: "Restricted expression of cell adhesion kinase-β in rat tissues." Amer.J.Pathol.150・1. 267-281 (1997)

Mitaka, T.：“大鼠组织中细胞粘附激酶-β 的限制性表达。”Amer.J.Pathol.150·1（1997）。

Ishino,M.: "Identification of an Efs isoform that lacks the SH3 domain and chromosomal mapping of human Efs." Oncogene. (in press). (1997)

Ishino,M.：“缺乏 SH3 结构域的 Efs 亚型的鉴定以及人类 Efs 的染色体定位。”