第2のFAK族キナーゼ、CAKβ、のカドヘリンを介するシグナル受容における役割

第二个 FAK 家族激酶 CAKβ 在钙粘蛋白介导的信号接收中的作用

• 批准号: 08878127
• 负责人: 佐々木 洋子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878127/
• 关键词: タンパク質チロシンキナーゼ; CAKβ; FAK; パキシリン; Hic-5; 焦点接着; チロシンリン酸化; 免疫組織化学; in situ hybridizaion; 細胞内局在性; CBP-1

私達は、FAK分子族に属する第2のタンパク質チロシンキナーゼをクローン化し、これを細胞接着キナーゼβ(CAKβ)と命名した。CAKβをアデノウイルスベクターを用いてcDNAから大量発現すると、細胞の接着性が低下し、細胞の形態が変化した。CAKβに共役するシグナル伝達路を明らかにするために、CAKβC-ドメインをプローベに用いてcDNAライブラリーをスクリーニングし、CAKβ結合タンパク質(CBP-1)のcDNAをクローン化した。CBP-1は、Hic-5のヒトホモログである事が明らかになった。Hic-5は焦点接着に局在した。Hic-5のアミノ酸配列は、焦点接着局在タンパク質であるパキシリンに最も近縁であった。Hic-5とパキシリンは、そのNドメインがCAKβおよびFAKのCドメイン後半部分と特異的に結合した。抗Hic-5抗体を用いて、WFB細胞抽出液からHic-5を免疫沈降すると、CAKβが共沈した。WFB細胞におけるCAKβのチロシンリン酸化は、血清、リゾホスファチジン酸(LPA)、エンドセリンなどによる刺激、および高浸透圧刺激で亢進するが、これらCAKβを活性化する刺激でHic-5のチロシンリン酸化も亢進した。Hic-5とCAKβとの結合は、Hic-5のチロシンリン酸化に重要であることを示唆する結果が得られた。tet系やアデノウイルスベクターを用いCAKβ、Hic-5およびこれらの変異体を過剰発現し、上流及び下流シグナル伝達路を検討している。Hic-5とパキシリンとは共に焦点接着に局在するが、その機能は異なっている可能性が強く、今後の研究により、Hic-5の機能を明らかにする必要がある。

Private は, the family of the FAK (molecular に す る 2 の タ ン パ ク qualitative チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ を ク ロ ー ン し, こ れ を cells then キ ナ ー ゼ beta (beta) CAK と named し た. CAK beta を ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い て cDNA か ら large 発 now す る と, cell の が の が し, then sex cells form - the し た. す CAK beta に total service る シ グ ナ ル 伝 を Ming da road ら か に す る た め に, CAK beta C - ド メ イ ン を プ ロ ー ベ に with い て cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し, CAK beta combine タ ン パ ク mass (CBP) の cDNA を ク ロ ー ン change し た. Cpp-1, Hic-5 ヒトホモログである ヒトホモログである shi が Ming ら になった になった. The Hic-5 に focus is then at the に. The acid coordination of Hic-5 is に, ア, ノ, and the focal point is located in the タ, パ, and the であるパキシリ, に, に is the most <s:1> close to であった. HTC - 5 と パ キ シ リ ン は, そ の N ド メ イ ン が CAK beta お よ び FAK (の C ド メ イ ン after half と specific に combining し た. Anti-hic-5 antibody を was immunodegraded with を て, WFB cell extract ら らHic-5を すると and co-precipitated with CAKβが た. WFB cells に お け る CAK beta の チ ロ シ ン リ ン acidification は, serum, リ ゾ ホ ス フ ァ チ ジ ン acid (LPA), エ ン ド セ リ ン な ど に よ る stimulation, お よ び high saturate 圧 stimulus で hyperthyroidism す る が, こ れ ら CAK beta を activeness す る stimulus で HTC - 5 の チ ロ シ ン リ ン acidification も hyperthyroidism し た. HTC - 5 と CAK beta と の は, HTC - 5 の チ ロ シ ン リ ン acidification に important で あ る こ と を in stopping す る results ら が れ た. Tet is や ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い CAK beta, HTC - 5 お よ び こ れ ら の - variant を through turning 発 し now, polite and び obscene シ グ ナ ル 伝 journey を beg し 検 て い る. HTC - 5 と パ キ シ リ ン と は に focus then に innings in す る が, そ の function は different な っ て い る strong possibility が く, future study に の よ り, HTC - 5 の functional を Ming ら か に す る necessary が あ る.

项目成果

Ohba,Takeaki.: "Interaction of two proline-rich sequences of cell adhesion kinase β with SH3 domains of p130^<Cas>-relatedproteins and a GTPase-activating protein,Graf." Biochemical J.330・3. 1243-1254 (1998)

Ohba，Takeaki.：“细胞粘附激酶 β 的两个富含脯氨酸的序列与 p130^<Cas> 相关蛋白和 GTP 酶激活蛋白的 SH3 结构域的相互作用，生物化学 J.330·3。” (1998)

Matsuya,Manabu.: "Cell adhesion kinaseβ forms a complex with a new member,Hic-5,of proteins localized at focal adhesions." J.Biol.Chem.273・2. 1003-1014 (1998)

Matsuya, Manabu.：“细胞粘附激酶β 与位于粘着斑的新成员 Hic-5 形成复合物。”J.Biol.Chem.273·2 (1998)。

Sasaki,H.: "Cloning and characterizaion of cell adhesion kinase β,a novel protein tyrosine kinase of the focal adhesion klinase subfamily." J.Biol.Chem.270・36. 21206-21219 (1995)

Sasaki, H.：“细胞粘附激酶 β 的克隆和表征，这是粘着斑激酶亚家族的一种新型蛋白酪氨酸激酶。J.Biol.Chem.270·36 (1995)。

Ishino.M.: "Molecular cloning of a cDNA encoding a phosphoprotein,Efs,which contains a Src homology 3 domain and associatesb with Fyn." Oncogene. 11・11. 2331-2338 (1995)

Ishino.M.：“编码磷蛋白 Efs 的分子克隆，其包含 Src 同源 3 结构域并与 Oncogene 11·11 2331-2338 (1995)”。

Mitaka,Toshihiro.: "Restricted expression of cell adhesion kinase-β in rat tissues." Amer.J.Pathol.150・1. 267-281 (1997)

Mitaka, Toshihiro.：“大鼠组织中细胞粘附激酶-β 的限制性表达。”Amer.J.Pathol.150·1（1997）。